梅毒螺旋体抗体测定SOP.docx

精选文档 梅毒螺旋体抗体测定标准操作程序（ SOP） 【目的】 指导免疫项目梅毒螺旋体抗体的测定。 【适用仪器】 酶标仪 ST-36O 、洗板机 ST-36W 等。 【该 SOP 变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人 员批准签字：专业主管、科主任。 【方法原理】 ELISA法：用HTP特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗TP抗体与包被抗原 反应，再与酶标 IgG 结合，形成抗原 -抗体-酶标抗体复合物，加底物（ TMB） 显色，在酶标仪上测定后根据 OD 值判定有无 TP 抗体的存在。 【标本要求】 种类：血清、血浆。 【试剂】 试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液 A、底物 液B、终止液。 保存条件及有效期：2--8 C储存。自生产日期起，有效期半年。 【质控品】 试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书 4- 8 C冷藏。 【操作步骤】 加样：每次试验设空白对照 1孔；阴性对照 3孔，阳性对照 2孔，分别加 入 HCV 阴、阳性对照 10 微升。除空白孔外，其余孔加入 50 微升样本。 温育：振荡混匀，盖上封板膜，置 37 土「C温育60分钟。 精选文档 洗涤：用洗板机洗板，重复洗 5 次后拍干。 加酶 :空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物 100 微升。 温育：振荡混匀，盖上封板膜，置 37 土「C温育30分钟。 洗涤：用洗板机洗板，重复洗 5 次后拍干。 显色：每孔加入底物缓冲液 50 微升，再加入底物液 50 微升，振荡混匀， 盖上封板膜，置37 ±1 C温育30分钟。 终止：每孔加入终止液 50 微升，混匀。 用酶标仪读值， 零置酶标仪 450nm 或双波长 450nm/630nm 下测定 OD 值。 结果判定 1. 阴、阳性对照和被检样品的 OD 值减去空白对照 OD 值即为计算值。 2?试剂空白需＜0.08，阴性对照孔值w 0.120，阳性对照孔值》0.300。 3．临界值（ cut off 值）的设定： cut off 值=0.100+ 阴性对照 OD 均值 4．被检样品的 OD 值＞= 临界值应判为 HCV 抗体阳性反应， ＜ 临界值为阴性反 应。 注意事项 1 ．各步加液均应使用加液器并经常校对其准确性，以避免实验误差。 2．封口胶只限一次性使用，以避免交叉污染。 3．洗涤时各孔均需加满洗液，防止因洗涤不充分造成非特异性反应。 4． HCV 抗体试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。 5．微孔条从冷藏环境中取出应在室温平衡后再打开密封袋，未用完者须放 入有干燥剂的密封袋中保存。 6．不同批试剂不能混用。 ．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。 精选文档 8．请严格按说明书操作 详见《珠海丽珠试剂有限公司的试剂盒说明书》