免疫组化-小鼠脑切片 protocol(改正).docVIP

免疫组化 实验材料：需要进行观察的脑片 存放位置：一抗、二抗、DAPI放在冰箱一层;山羊血清放于冰箱二层。 所用试剂：10%山羊血清；PBST（PBS+0.7%Triton）；一抗（1:1000）；二抗（1:500）；PBS（配制方法：将一个1L的烧杯洗净晾干，称量8g NaCl，0.2g KCl,1.44g Na2HPO4,0.24g KH2PO4放至烧杯中，向烧杯中添加800ml ddwater，放在磁力搅拌器上搅拌，调PH至7.2，后定容至1L）；DAPI（用PBS配制，1:10000）；抗荧光淬灭封片液 仪器或器皿：24孔板（洗净晾干，为了便于后续操作，要将24孔板盖子和板子上画一条横线以防止盖子盖错，在盖子上划线对24孔板按照其作用（如：装有洗一抗用的PBST的孔，则标明PBST（洗一抗用））进行分区）；室温摇床 实验步骤： 1、封闭：将冷冻切片所得的脑片进行封闭，封闭用1ml山羊血清+9ml PBST，每孔加800微升，将脑片用玻璃钩取出放入24孔板中，放于4℃过夜。 2、封闭完成后，用玻璃钩将脑片取出放于添加了一抗（1:1000，一抗用封闭液配制）（rabbit or mouse or chicken）的24孔板中进行孵育，置于室温摇床，8h（记得计时），之后放于4℃过夜。（一抗有两种，即单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体特异性较强，但亲和性较弱；多克隆抗体特异性较弱