食品微生物检验技术 革兰氏染色 革兰氏染色微课视频.ppt

《食品微生物检验》 重庆化工职业学院 环境与质量检测学院 《食品质量与安全》精品课程系列 主讲人：黄月 丹麦医生，C.Gram于1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。 染色步骤： 结晶紫初染---碘液媒染---乙醇脱色---番红复染 染色结果： 紫色：革兰氏阳性菌 红色：革兰氏阴性菌 普通光学显微镜、结晶紫染色剂、番红染色液、革兰碘液、95%乙醇、接种环、酒精灯、载玻片、滴管、烧杯、洗瓶等。 1.涂片制备：涂片、干燥、固定； 2.染色：在已经制好的涂片菌膜处，滴加石炭复红染液染色1-2min； 3.水洗：斜置载玻片，倾去染液，用流水轻轻冲去染液至流水变清，注意水流不要直接重载涂菌处，以免菌体被冲掉； 4.干燥：自然干燥或电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。 大肠杆菌（1000倍） 1.细菌涂片的制备 2.初染 3.媒染 4.脱色 5.复染 枯草芽孢杆菌（1000倍镜） 1、涂片太厚影响脱色且不利于细胞形态观察，应注意涂菌量，避免菌多菌厚或菌少菌薄对实验结果的影响。 2、干燥过程中注意火焰温度不宜太高。 3、染色过程中，初染、媒染、脱色、复染过程时间的把握；染色剂滴加速度不宜过快，防止涂片上菌体的脱落。 为什么要选用对数期的菌来做革兰氏染色实验？ 片头，PPT背景+音乐 * 解说词：（老师出镜+字幕+本页PPT） 大家好！今天我们一起来学习革兰氏染色。 * 解说词：（字幕+图片动画依次出现） 细菌的图片和染色是微生物实验的基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。可利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚的观察到其形态、结构以及细菌排列的状态，此为简单染色法。 解说词：（字幕+图片） 革兰氏染色法是著名微生物学家C.Gram于1884年发明的鉴别细菌的染色方法。 染色步骤包括： 结晶紫初染---碘液媒染---乙醇脱色---番红复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被洗脱而使细菌染成复染剂的颜色（红色），则为革兰氏阴性菌。 解说词：（字幕+图片动画依次出现） 本实验所需材料包括：普通光学显微镜、结晶紫染色剂、番红染色液、革兰碘液、95%乙醇；接种环、酒精灯、载玻片、滴管、烧杯、洗瓶等。 解说词： 下面我们学习简单染色的步骤。（字幕+PPT图片动画） 解说词：（PPT图片） 细菌涂片的制备 切换到拍摄视频。1.制片：取一张清洁无油的载玻片，以无菌接种环取灭菌生理盐水于载玻片中间位置。无菌挑取菌种少许，与载玻片中央的生理盐水混匀，涂布成直径为1cm大小的均匀薄膜涂片。接种环烧灼后放回试管架。 切换到拍摄视频。2.干燥：涂片于室温或火焰上方干燥。 切换到拍摄视频。3.固定：固定的目的是使细胞质凝固成固定细胞形态，使菌体较牢地黏附在玻片上；改变细胞对染料的通透性，因为活的细胞不容易染色。手持载玻片的一端，标本面向上，在酒精度火焰外层较快地来回通过3次，温度不能太高，否则会改变甚至破坏细胞形态，以玻片温度达到皮肤所能耐受的温度为宜，放置待冷后进行染色。 切换到拍摄视频。4.染色：在已经制好的涂片菌膜处，滴加石炭复红染液染色1-2min； 切换到拍摄视频。5.水洗：斜置载玻片，倾去染液，用流水轻轻冲去染液至流水变清，注意水流不要直接重载涂菌处，以免菌体被冲掉； 切换到拍摄视频。6.干燥：自然干燥或电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。只做好后可以镜检。 此为简单染色后在光学显微镜1000倍镜下观察到的大肠杆菌。（解说词） * 解说词： 下面我们学习革兰氏染色的步骤。（字幕+PPT图片动画） 解说词:（PPT图片） 切换到拍摄视频。脚本字幕1.涂片制备：与简单染色相同，涂片、干燥、固定； 切换到拍摄视频。脚本字幕2.初染：涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1 min，水洗； 切换到拍摄视频。脚本字幕3.媒染：滴加革兰氏碘液，作用1 min，水洗； 切换到拍摄视频。脚本字幕4.脱色：用滤纸吸取玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管递加95%乙醇脱色约15—30s，直至染色液被洗掉，不要过分脱色，水洗； 切换到拍摄视频。脚本字幕5.复染：滴加复染液，复染1 min，水洗，待干，镜检。 解说词： 此为枯草芽孢杆菌经革兰氏染色后显微镜下的图片，呈蓝紫色，为革兰氏阳性细菌。 * 解说词： 实验中的注意事项（字幕+PPT图片） 1、涂片太厚影响脱色且不利于细胞形态观察，应注意涂菌量，避免菌多菌厚或菌少菌薄对实验结果的影响。 2、干燥过程中注意火焰温度不宜太高。 3、染色过程中，初染、媒染、脱色、复染过程时间的把握；染色剂滴加速度不宜过快，防止涂片上菌体的脱落。 * 解说