初选培养基实验方案.docVIP

初选培养基实验方案 一、主要试剂药品 羧甲基纤维素钠粉(CMC-Na)， 吐温-80， K2HPO4 KH2PO4 ,NaNO3 KCl ,CaCl， MgSO4, FeSO4, 微晶纤维素粉， 刚果红， 麸皮， （NH4）2SO4, NaCl， 去皮马铃薯 ，麦芽糖， 蛋白胨， 酵母膏， 1mg/ml标准葡萄糖溶液， 1％CMCNa底物溶液， 柠檬酸 柠檬酸钠， 乙酸 乙酸钠， 酒石酸钾钠 ， NaOH, 石碳酸， 无水亚硫酸钠， 无水葡萄糖。 二、 采样 动物粪便，动物饲料（以玉米秸秆为主），土层。(100g—200g) 三、 培养基 初筛培养基一:梭甲基纤维素钠培养基（细菌，真菌鉴别）。参考查氏培养基，用梭甲基纤维素钠取代其中的蔗糖，通过观察培养基上的菌落周围有无水解圈，以及水解圈的大小和清晰程度，并经反复试验后，最终确定梭甲基纤维素钠添加量为5g，其余配方不变。并用稀盐酸调节PH在 5.5一6.0。 梭甲基纤维素钠5g; KH2PO4 lg 琼脂 17g NaN03 3g KCL 0.5g MgS04 0.5g 蒸馏水 l000ml Feso4 0.01g (调pH在5.5一6.0。于121℃，0.llMpa下灭菌30min备用)。 注：如果不调梭甲基纤维素钠培养基的PH值则较适合用于产中性纤维素酶菌株的筛选，比如长梗木霉、腐殖菌、芽抱杆菌等。如调PH值在 5.0一6.0之间较适合用于产酸性纤维素酶菌株的筛选，比如绿色木霉、里氏木霉、康氏木霉、黑曲霉、青霉等。 初筛培养基二:纤维素刚果红鉴别培养基I。（放线菌鉴别）。参考各种纤维素刚果红鉴别培养基的配方，通过观察菌落周围水解圈的形态，经反复试验后确定微晶纤维素粉的添加量为5g一20g。 微晶纤维素粉 5.0g （NH4）2SO4 2g 刚果红 0.2g KH2PO4 1g 琼脂 20g NaCL 0.5g 蒸馏水 1000ml MgSO4 0.5g (自然PH。于121℃，O.11Mpa下灭菌30min备用)。 I初筛培养基三:纤维素刚果红鉴别培养基。 微晶纤维素粉 20g （NH4）2SO4 2g 刚果红 0.2g KH2PO4 1g 琼脂 20g NaCL 0.5g 蒸馏水 l000ml MgSO4 0.5g (自然pH。于121℃，0.llMpa下灭菌30min备用)。 初选培养基四：改良细菌刚果红纤维素琼脂培养基: K2HPO4 0.5g/L， (NH4)2SO4 2g/L， MgSO4 .7H2O o.25g/L， 微晶纤维素粉 1.88g/L， 刚果红0.2g/L， 琼脂18g， pH值自然，12l℃灭菌20min。 马铃薯麦芽糖琼脂培养基：（斜面活化保藏培养基）: 去皮马铃薯200g， 麦芽糖20g， 琼脂15g， 蒸馏水1000ml。 (自然PH值。于121℃，0.llMpa下灭菌30min备用)。 初选培养基五：高氏1号琼脂培养基（放线菌分离培养基） 可溶性淀粉2%， KNO3 0. 1%， NaCL 0. 05%， K2HP04 0. 05%， MgSO4 0. 05%， FeSO4 0. 001%， 琼脂2% 初选培养基六：秸秆腐解琼脂培养基 （放线菌分离培养基） 称150g堆腐至发黑发粘