生化分离与纯化技术 实训项目 大蒜细胞SOD酶的提取和分离.ppt

大蒜细胞SOD酶的提取和分离 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 产品简介 一、产品简介 SOD是Super Oxide Dismutase 缩写，中文名称超氧化物歧化酶，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。 SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 产品简介 SOD类型：超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种： 第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中； 第二种是是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内； 第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 产品简介 二、产品用途 1、药物类：主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者； 2、生化制药：作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上，可抗衰老，抗肿瘤、调节人体内分泌系统； 3、化妆品：可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以SOD为主要成份的化妆品风靡世界，引发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真； 保健食品、饮料：SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销。在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 实训目标 1.掌握有机溶剂沉淀法的原理和基本操作。 2.掌握SOD酶提取分离的一般步骤。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 实训原理 超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子（O2-）进行岐化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织和细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲液提取出来。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。 有机溶剂沉淀的原理是有机溶剂能降低水溶液的介电常数，使蛋白质分子之间的静电引力增大。同时，有机溶剂的亲水性比溶质分子的亲水性强，它会抢夺本来与亲水溶质结合的自由水，破坏其表面的水化膜，导致溶质分子之间的相互作用增大而发生聚集，从而沉淀析出。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 实训试剂与设备 一、试剂和材料 新鲜蒜瓣，0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.8），氯仿-乙醇混合液（氯仿-无水乙醇3：5），丙酮（用前预冷至-10℃）。 二、实验器材 研钵，石英砂，烧杯(50mL)，玻璃棒，pH计，冷冻离心机，离心管。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 生产实训 一、生产前准备 1、检查生产原料、各种生产用试剂； 2、检查生产设备； 3、检查生产记录等文件。 二、生产操作 1、磷酸缓冲液制备粗酶液：将蒜瓣去外膜,于搅拌机中搅拌10min后移至研钵中研磨至蒜泥状，加入3倍体积( mL /mg)的磷酸缓冲液,浸泡 30~ 45min后用 6层纱布抽滤。 将滤渣再用 2倍磷酸缓冲液浸泡 30min后, 6层纱布抽滤。如此反复共3次，收集3次抽滤所得滤液。 2、采用热变性法对粗酶液进行粗提：将大蒜中 SOD酶液于 60℃热处理 20min , 8 500r /min离心 10min ,弃沉淀, 取上清液。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 生产实训 3、采用丙酮沉淀法进行分离纯化：将酶液置于冰浴中,加入- 18℃预冷的丙酮，搅拌 10min，于 4500r/min离心 15min，弃上清液，用50mmol /L磷酸缓冲液溶解其沉淀后,透析磷酸缓冲液, 4℃ 过夜，4500 r/min离心 10min ，测定上清液的 SOD酶活力。 大蒜细胞SOD酶的提取和分离 产品检测 一、检测原理 邻苯三酚在酸性环境中稳定，但在弱碱性环境中会发生自氧化反应,邻苯三酚在自氧化时只接受一个电子生成超氧阴离子 自由基(O2+O2一 ),并在其自氧化 过程