《细胞生物学》第2章研究方法.pptx

第2章 细胞生物学研究方法;本章主要内容;第一节 细胞形态结构的观察方法;;一、光学显微镜 (light microscope);（一）普通复式光学显微镜——组成;（一）普通复式光学显微镜——成像;? 分辨率：显微镜最重要的性能参数;Figure 9-10, 11a Molecular Biology of the Cell (? Garland Science 2008);（二）相差显微镜和微分干涉显微镜;（二）相差显微镜和微分干涉显微镜;（二）相差显微镜和微分干涉显微镜;;特 点;应 用：无色透明活体标本；无色 荧光标本；染色标本；显微操作等.;? 聚光镜中央有挡光片， 照明光线不直接进人 物镜，被标本反射和 衍射的光线能进入物 镜； ? 背景是黑的，物体边 缘是亮的。 ? 观察 4~200 nm的微粒 子； ? 分辨率比普通显微镜 高50倍。;Four types of light microscopy;（四）荧光显微镜——基本原理;荧光物质种类;（四）荧光显微镜——基本原理;（四）荧光显微镜——样品制备;（四）荧光显微镜——应用;（五）激光扫描共焦显微镜;（五）激光扫描共焦显微镜;荧光显微镜（a）和激光扫描共焦显微镜（b）;小 结;二、电子显微镜;（一）透射电子显微镜;1．电子显微镜与光学显微镜的基本区别;2．电子显微镜的分辨本领与有效放大倍数;3．电子显微镜的基本构造;（二）透射电镜制样技术——超薄切片技术;超薄切片技术显示的细胞超微结构;（二）透射电镜制样技术——负染色技术;（二）透射电镜制样技术——冷冻蚀刻技术;电镜三维重构与低温电镜技术;（三）扫描电镜技术;（三）扫描电镜技术;小结：光镜、透射电镜与扫描电镜原理比较;电子显微镜与光学显微镜的基本区别;三、扫描隧道显微镜;;;小麦胚乳细胞内淀粉质体（TEM，周竹青，2000）;第二节 细胞及其组分的分析方法;一、用超离心技术分离细胞组分;一、用超离心技术分离细胞组分;;? 差速离心结合密度梯度离心分离细胞组分示意图;二、细胞成分的细胞化学显示方法;二. 细胞常规组分的定位与定性;福尔根反应 Feulgen stain;2) 原位杂交技术;FISH (Fluorescent In Situ Hybridization);人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片;3) 免疫荧光定位（抗原、抗体特异结合）;4）免疫电镜技术;5）流式细胞技术;;;;;;;;;;;;;10）DNA操作技术-----聚??酶链式反应;反应体系：;反应过程：;三、酵母双杂交技术;四、荧光共振能量转移技术(FRET);四、荧光共振能量转移技术(FRET);FRET产生的条件;五、放射自显影技术;根据实验要求选择合适的同位素;五、放射自显影技术;胰岛β细胞电镜放射自显影结果;第三节 细胞培养与细胞工程;一、细胞培养——动物细胞培养;;一、细胞培养——植物细胞培养;一、细胞培养——植物细胞培养 ? 原生质体培养：体细胞经纤维素酶处理去掉细胞壁的原生 质体经诱导分化长成植株;（一）细胞融合与单克隆抗体技术 ? 细胞融合 – 灭活的病毒 – 化学物质（如PEG） – 电融合 同核体（homokaryon） 异核体（heterokaryon） 合核体（synkaryon）;单克隆抗体与多克隆抗体;单克隆抗体的制备;（二）显微操作技术与动物的克隆;克隆羊多莉的培育;;第五节 模式生物与功能基因组的研究;一、细胞生物学研究常用的模式生物;（一）大肠杆菌;（二）酵母;（三）线虫 (Caenorhabditis elegans);（四）果蝇 (Drosophila melanogaster);（五）斑马鱼 (Danio rerio);（六）小鼠 (Mus musculus);（七）拟南芥 (Arabidopsis thaliana);二、突变体制备技术——RNA水平;二、突变体制备技术——DNA水平;;1.从光源、透镜和成像三个方面比较光学显微镜和 电子显微镜。 2.说明对不同细胞、细胞不同组分进行分级分离所 用方法的基本原理。 3.举例说明电子显微技术与细胞分子生物学技术的 结合在细胞生物学研究中的应用。