实验一 分光光度计的性能检查.docVIP

实验一 分光光度计的性能检查 (一)?实验目的??1、掌握分光光度计的性能检查指标。??2、熟悉仪器检查的意义及一般检查方法。 3、了解分光光度计的正确使用方法。 (二)?实验原理??分光光度计利用单色器(光栅、棱镜)获得单色光，仪器的波长读数应有一定的准确度，测量溶液的透光率(或吸光度)应具有足够的灵敏度和重现性。??当溶液浓度改变时，仪器测定值的改变在一定范围内应符合Beer定律，即仪器应具有较好的线性。??成套比色皿中各比色皿的透光性能应相同。实际工作中，同厚度的比色皿由于材料、工艺等原因，往往透光率不一致，影响测定结果，故使用前需进行配对性试验。(三)?仪器与试剂??仪器:?分光光度计；比色皿；镨钕滤光片；电子天平；容量瓶。 试剂:?K2Cr2O7、CuSO4、CoCl2、蒸馏水。 (四)?实验步骤??1、比色皿配对性检查 同种厚度的比色皿之间，透光率误差应小于0.5%。检查方法如下:?精密移取0.02mol/L的K2Cr2O7，溶液10m1至25m1容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，备用。取稀释后的溶液分别注入厚度相同的几个比色皿中。在440.0m波长处，以空气做空白，调透光率为100%。分别测定各比色皿中溶液的透光率，然后选择相差不大于0.5%的比色皿配对使用。??2.波长精度检查 测量800～812nm范围内，不同波长下镨钕滤光片的透光率，通过记录T值最小时，即A最大时的波长λ，进行仪器波长精度确认(波长值应在806～810nm内，符合要求)。??3.线性误差 分别在440、510、690nm处测量表3-3中K2Cr2O7、CoCl2、CuSO4三种溶液的不同浓度的吸光度，根据K=（A1+A2+A3）/(C1+C2+C3)； A误差=（A-A）/A×100% 计算其线性误差。??4.灵敏度(ΔA/ΔC，μg/ml)??测量表3-4中K2Cr2O7、CoCl2、CuSO4三种溶液的不同浓度的吸光度，计算不同波长下仪器的灵敏度（ΔA/ΔC）。??5.重现性(ΔT) 取2000μg/ml CuSO4溶液，在690nm连续测定7次透光率，计算Tmax与Tmin之差。（如小于0.5%，则符合要求） (五)?数据记录与处理 1、比色皿配对性检查（表3-1） 表3-1 配对性检查结果表 比色皿号 1 2 3 4 测量值（T） 100% ΔT应小于0.5%。 2、波长精度检查 测量800～812nm范围内，不同波长下镨钕滤光片的透光率（表3-2） 表3-2 波长精度检查结果表 λ 800 801 802 803 804 805 806 T λ T 807 808 809 810 811 812 T值最小时，即A最大时波长λ与808nm相对比，波长偏差应小于2nm。 3、线性误差 按照表3-3中溶液的不同浓度测定吸光度，并记录。 表3-3 线性误差检查结果表 溶液 C（μg/ml） λmax A K A A误差 K2Cr2O7 30 90 150 440 A1 A2 A3 CoCl2 2000 6000 10000 510 A1 A2 A3 CuSO4 2000 6000 10000 690 A1 A2 A3 4、灵敏度(ΔA/ΔC，μg/ml) 测量下表中三种溶液的不同浓度的吸光度，计算不同波长下仪器的灵敏度（表3-4）. 表3-4 灵敏度检查结果表 溶液 C1（μg/ml） C2（μg/ml） λ（nm） ΔA ΔA/ΔC K2Cr2O7 300 330 440 CoCl2 2000 2200 510 CuSO4 2000 2200 690 各溶液灵敏度测定值在规定范围内（见附录2），说明仪器有较高的灵敏性。 5.重现性(ΔT) CuSO4 2000μg/ml在690nm连续测定7次透光率，Tmax与Tmin之差小于0.5%，说明仪器重现性符合要求（表3-5）。 表3-5 重现性检查结果表 次数 1 2 3 4 5 6 7 ΔT T (六)?注意事项在不同波长下测定时，注意用空白溶剂调整T为100%。 (七)?实验提示在进行不同样品溶液测定时，需要强化比色皿的润洗以保证溶液浓度一致。 (八)?思考题1、哪些性能指标是在日常测定工作中经常需要进行检查的??为什么? 2、影响波长精度的因素有哪些? 附: 1、线性误差规定表 吸光度范围 线性误差 0.1～0.3 ±6%内 0.3～0.6 ±3%内 0.6～0.8 ±4%内 2、灵敏度规定表 溶液 灵敏度（吸光度/μg/ml） 测定波长 重铬酸钾 ≥0.01/2.5 440nm 氯化钴 ≥0.01/150 510nm 硫酸铜 ≥0.01/150 690nm