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. 七、思考题 1．为什么要将试管中的淀粉酶原液置70℃水浴中保温15min？ 2．为什么要将各试管中的淀粉酶原液和1%淀粉溶液分别置于40℃水浴中保温？ 实验五　蛋白质含量的测定 一、实验目的 学习凯氏定氮法的原理和操作技术。 二、实验原理 含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。 二、实验原理 含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。 三、实验试剂、器材 1．主要仪器 (1)凯氏定氮蒸馏装置 (2)消化炉 (3)电子天平 2．试剂 (1)浓硫酸（化学纯） (2)硫酸钾-硫酸铜混合催化剂 (3)甲基红-溴甲酚绿混合指剂 (4)2%硼酸溶液 (5)0.01mol/L HCl标准盐酸溶液 (6)40%NaOH 四、操作步骤 1、消化：在电子天平上称取小麦粉0.2000g--0.4000g 置于凯氏试管底部→加混合混合催化剂0.5g和3mL浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左右）取出放入通风橱内至不冒白烟，向其中加20mL水，并移至100mL容量瓶定容→即得样品消化液。 同时每4组8人做1空白实验：0.5g混合催化剂+3mL浓硫酸置于凯氏试管中放入消化炉加热至淡绿色（1h左右）→冷却后加水移入100mL容量瓶中定容得空白消化液。 2. 蒸馏与吸收：吸取10mL 2%的硼酸于三角瓶中→加4d甲基红-溴甲酚绿混合指示剂（若变绿色则用0.01mol/L HCl调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5mL消化液从漏斗上方加入蒸馏室内用水洗两次，并加入10mL 40%NaOH后水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打开通气阀进行加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min→先移去吸收液再停止加热以防倒吸。 3. 滴定：用0.01mol/L HCl 滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准盐酸的体积(V1.V0)。 　　　 C：标准盐酸溶液摩尔浓度(0.01)。 V1：滴定样品用去的盐酸溶液平均毫升数。 V0：滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均毫升数。 W：样品重量（mg）。 14.01：氮的原子量。 K=5.7 M=12.5% V2=100mL V3=5mL 五、结果计算 实验六 甲醛滴定测氨基氮 一、实验目的 1．加深对氨基酸两性解离的认识。 2．掌握甲醛滴定法的原理及应用。 三、实验仪器、试剂及材料 1. 实验仪器： 微量碱式滴定管（10mL）、 2. 试剂： (1)．0.5％酚酞指示剂：。 (2)．1％甘氨酸即1克加100mL水配制而成 (3)．0.1mol／L标准氢氧化钠溶液（使用前需标定）。 (4)．中性甲醛溶液：取分析纯甲醛(36％～37％)溶液20mL，加0.5％酚酞指示剂约3滴，滴加0.100mol／L的氢氧化钠溶液，使溶液呈微粉红色（临用前中和）。 氨基酸为两性离子，在水溶液中有下列平衡： RCHCOO- +2HCHO ＝ RCHCOO- + H+ ↓ ↓ NH3+ N(CH2OH)2 常温下甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合生成亚羟甲基化合物，使上述平衡右移促使NH3+释放H+，从而使溶液酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内（pH值9.0左右），根据滴定终点时所消耗标准碱的量即可算出反应体系中存在的游离氨基即氨基氮的含量如果样品为一种已知的氨基酸，即可算出该氨基酸的含量。如果样品为未知氨基酸或几种氨基酸的混合物，则只能算出其氨基氮的含量。 二、实验原理 四、操作方法 已知氨基酸溶液中氨基酸含量的