糠酸莫米松抑制结肠癌细胞增殖和迁移的机制研究.pdf

目 录 摘 要1 Abstract3 前 言6 第一部分 糠酸莫米松抑制结肠癌细胞的增殖9 1 材料与方法9 2 结果25 第二部分 MF抑制结肠癌细胞的迁移37 1 材料与方法37 2 结果40 讨 论52 结 论57 参考文献58 综 述：糖皮质激素受体在肿瘤中的研究进展62 附 录77 攻读学位期间发表论文情况78 致 谢79 个人简历80 新乡医学院硕士学位论文 糠酸莫米松抑制结肠癌细胞增殖和迁移的机制研究 摘 要 背景 结肠癌（Coloncancer）是临床上常见的消化道恶性肿瘤之一，现已成为全球三 大常见肿瘤之一。按照世界卫生组织（WHO）公布的数据显示，结直肠癌在男性中 为第三大易发肿瘤，仅次于肺癌、胃癌；在女性中为第二大易发肿瘤，仅次于乳腺癌， 目前全球每年新增结直肠癌病例超过 100 万。在我国，结直肠癌的死亡率仅次于肺 癌、肝癌、胃癌、食管癌， 位居第 5 位， 严重危害居民健康，给社会和家庭经济 造成沉重负担。糠酸莫米松（Mometasonefuroate，MF）是一种有效的糖皮质激素， 是具有高亲和力的合成的17-杂环类甾体类固醇，用于局部治疗皮肤，肺和鼻子上的 炎症，具有抑制免疫反应及介质释放、促进介质代谢的功效，缓解相关症状等多方面 作用，且具有广泛的药理作用。虽国内外有大量结肠癌的研究报道，但关于MF对结 肠癌的抑制作用研究较少。 目的 通过体外细胞生物学实验研究MF对结肠癌细胞RKO、LoVo细胞株增殖、凋亡、 迁移能力的影响；为深入阐明MF在结肠癌细胞中的作用和机制奠定理论基础。 方法 1.通过CCK8 （CellCountingKit-8）实验检测MF对结肠癌细胞RKO、LoVo细 胞株增殖能力的影响。设立MF浓度为0μM、1μM、10μM、20μM、50μM、100μM， 作用时间为0、24h、48h、72h，选择最适时间及最适浓度进行平板克隆形成实验。 2.利用流式细胞术分析MF对结肠癌细胞凋亡能力的影响。 3.采用划痕愈合实验和Transwell迁移实验检测MF对结肠癌细胞系的迁移能力 影响。 4.通过实时定量聚合酶链式反应（real-timequantitativepolymerasechainreaction, qPCR）和蛋白印迹 （Westernblotting，WB）方法检测MF处理后对结肠癌细胞系中 增殖、凋亡、迁移相关mRNA和蛋白质的表达情况。 1 新乡医学院硕士学位论文 结果 1. 细胞CCK8检测结果显示：MF作用于结肠癌细胞RKO、LoVo细胞系与对 照组相比，MF实验组细胞生长速度明显减慢 （P0.05），并且具有时间依赖性和浓 度依赖性，选择最适浓度（20μM）和最佳时间（48h）进行后续实验继续验证（P0.05)。 2. 平板克隆形成实验结果显示：MF实验组的细胞平板克隆形成堆数明显少于 对照组细胞（P0.05)。 3. 流式细胞凋亡实验显示：MF实验组细胞凋亡率显著高于对照组（P0.05)。 4. 细胞划痕愈合实验结果显示：MF作用后的实验组细胞迁移速度明显低于对 照组 （P0.05）；Transwell迁移实验结果显示：MF作用后的实验组细胞穿过膜的数 量明显比对照组少 （P0.05)。 5. qRT-PCR实验，结果显示：MF实验组细胞与增殖相关的mRNA、与迁移相 关的mRNA和与EMT相关的mRNA和对照组相比明显减少 （P0.05)。 6. Westernblotting MF 实验，结果显示： 实验组细胞与对照组相比与增殖相关的 蛋白、与迁移相关的蛋白和与EMT相关的蛋白和对照组相比明显减少 （P0.05)。 结论 1.MF在体外抑制结肠癌细胞的增殖、促进凋亡； 2.MF在体外抑制结肠癌细胞的侵袭和迁移； 3.MF可能抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥作用。 关键词 糠酸莫米松；结肠癌；增殖；凋亡；迁移