人脐带血CD133~+细胞构建人源化小鼠模型效果评价及小檗碱对其体外扩增的影响.pdf

新乡医学院硕士学位论文 目 录 + 人脐带血CD133 细胞构建人源化小鼠模型效果评价及小檗碱对其体外扩增的影响1 摘 要1 前 言10 + 第一部分 人脐血CD133 细胞构建人源化小鼠模型的效果13 材料与方法13 实验方法16 实验结果20 讨论21 结论23 附图24 + 第二部分 小檗碱对人脐血CD133 细胞体外扩增的影响28 材料与方法28 实验结果38 讨论41 结论43 附图44 参考文献50 综述57 附录69 攻读学位期间发表文章情况70 致 谢71 个人简历72 新乡医学院硕士学位论文 + 人脐带血CD133 细胞构建人源化小鼠模型效果评价及小檗碱 对其体外扩增的影响 摘 要 背景 人源化小鼠模型被认为是目前用于疾病发生发展过程中免疫基础研究和临床前 药物评估的最佳工具。然而，该模型的构建效果受细胞来源、植入途径、免疫缺陷小 鼠品系和预处理方式等多种因素的影响。目前，建立人源化小鼠模型通常是通过辐照 + 预处理新生免疫缺陷小鼠后，再将人脐带血 （UCB）CD34 造血干细胞 （HSCs）经 + 尾静脉注射到体内的方法。但据报道，人UCB-CD133 HSCs移植后在分化数量和质 + 量上均优于CD34 HSCs，骨髓腔内注射 （IBMI）更适合HSCs发育分化，NOG(NOD Shi-SCID IL-2Rγcnull)小鼠是目前HSCs移植的最佳受体。此外，NOG 小鼠对辐射敏 感且辐射处理需专用设备和人员，而临床移植常用的预处理药物白消安(Busulfan)是 一个较为理想的替代。 人源化小鼠免疫系统重建效果依赖于所植入HSCs 的数量，更多的HSCs往往能 够获得更高的重建水平。但单份UCB 中可分离的HSCs数量有限，不能大量构建人 源化小鼠模型。若将多份UCB-HSCs构建的人源化小鼠用于同一实验，则很难控制 个体差异对实验结果的影响。因此如何通过体外扩增获得大量均质的人HSCs是目前 亟待解决的问题。 目的 + 通过骨髓注射将人UCB-CD133 HSCs植入经白消安预处理的NOG 小鼠体内， 构建具有人免疫系统的人源化小鼠模型；检测小檗碱 （Berberine）对人UCB-CD133+ HSCs 体外扩增的影响。 1 新乡医学院硕士学位论文 方法 + 1. 将人UCB-CD133 HSCs植入经白消安预处理的NOG 小鼠骨髓腔，构建免疫系统 人源化小鼠模型，并评估构建效果； 1.1 采用Ficoll 密度梯度离心法从健康孕妇UCB 中分离单个核细胞(MNCs)后， + 再用磁珠分选法从MNCs 中分选CD133 HSCs。 + + 1.2 采用流式法检测MNCs 中CD133 HSCs 百分比及磁珠分选出的C