仪器分析 任务4：高效液相色谱仪 高效液相色谱分类和结构.pptVIP

第二节 HPLC仪器 高压输液系统：储液罐、吸滤器、高压 输液泵、脱气装置及梯度洗脱装置 进样系统：进样器，进样阀 分离系统：色谱柱，恒温箱 检测系统：检测器 记录系统：记录装置、色谱工作站 1、贮液器和吸滤器： 一、 高压输液系统 贮液器: 1-2L的玻璃瓶 溶剂吸滤器: Ni合金，孔约0.45 ?m，防止颗粒物进行泵内。 2、高压输液泵 一、 高压输液系统 流量准确可调、可调范围宽：流动相流速在0.5-2mL/min，输液泵的最大流量5-10mL/min 耐高压：输出压力常达30-60MPa 液流稳定。 结构材料应耐化学腐蚀 活塞型往复泵 ——液相色谱仪中使用最广泛的恒流泵 双活塞型往复泵 一、 高压输液系统 离线超声波振荡脱气 在线惰性气体鼓泡吹扫脱气 在线真空脱气装置 3、脱气装置 ： 将相对分子量小的气体从溶剂中除去 一、 高压输液系统 4、梯度洗脱装置： 为什么要进行梯度洗脱？ 使保留值相差很大的多种成分在合理的时间内全部洗脱并达到相互分离 梯度洗脱：在分离过程中逐渐改变流动相组成，如溶剂的极性、离子强度、pH值等。 一、 高压输液系统 高压梯度： 用于二元梯度，用两个泵分别按设定的比例输送A和B两溶液至混合器 一、 高压输液系统 低压梯度： 只用一个高压泵，在泵前安装了一个比例阀，混合就在比例阀中完成。 二、 进样系统 将样品溶液准确送入色谱柱的装置 ——手动方式、自动方式 密封性好、死体积小、重复性好、进样时引起色谱系统的压力和流量波动要很小。 进样器要求 常用手动进样器——六通阀进样器， 二、 进样系统 六通阀进样 Load Inject 三、 色谱柱 柱长15~30cm，内径4~5mm 基质 (硅胶或高分子聚合物微球) 功能层(固定在基质表面对样品分子保留起实质作用的有机分子或功能团) 四、 检测系统 用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。 溶质性检测器：仅对被分离组分理化特性响应 紫外、荧光、电化学检测器 总体检测器：对试样和洗脱液总理化性质响应 示差折光，电导检测器 石英窗 接色谱柱 UV 光电 倍增管 废液 四、 检测系统 1、紫外检测器 微量吸收池，光程为2-10mm, 体积约为1~10 ?L 最小检测量10-9g·ml-1 对流量和温度波动不敏感 可用于梯度洗脱。 最常用的通用型检测器 四、 检测系统 光电二极管阵列检测器 时间、光强度和波长三维谱 2、荧光检测器 四、 检测系统 灵敏度高 选择性好 样品量很小 适合药物和生化样品分析 3、蒸发光散射检测器 四、 检测系统 适于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测 通用型和质量型检测器 光源 调零 光学零 参比 样品 平面镜 透镜 光电转换 记录仪 放大器 遮光板 溶剂相和样品+溶剂相对光的折射率不同，造成两束光强度差变化，差示信号放大记录代表样品浓度 通用型检测器，灵敏度为10-7g/ml 对温度变化敏感，且不适于梯度淋洗 4、示差折光检测器 四、 检测系统 接参比电极 和对电极 接色谱柱 Teflon 塑料块 1 cm 工作电极 (Pt, Au, 碳糊) 5、安培检测器 利用待测物在工作电极表面发生反应产生电流，此电流大小与待测物浓度成正比。 流动相必须含电解质，且呈化学隋性。 只能检测具有电活性的物质。 四、 检测系统 检测器 梯度 主要特点 紫外-可见光 可 对流速和温度变化敏感；池体积可制作得很小；对溶质的响应变化大。 荧光 可 选择性和灵敏度高；易受背景荧光、消光、温度、pH和溶剂的影响。 化学发光 困难 灵敏度高；发光试剂受限；受流动相和脉动的影响。 电导 不可 是离子性物质的通用检测器；受温度和流速影响；不能用于有机溶剂体系。 电化学 困难 选择性高；受流动相pH值和杂质的影响；稳定性差。 蒸发光散射 可 可检测所有物质。 示差折光 不可 检测所有物质；不适合微量分析；对温度变化敏感 质谱 可 主要用于定性和半定量。 原子吸收光谱 可 选择性高。 ICP发射光谱 可 可进行多元素同时检测。 火焰离子化 可 柱外峰展宽。 五 、 数据处理和计算机控制系统 色谱工作站 在线显示 自动采集 处理储存 自动控制 谢谢！ 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库