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第九章植物种质资源离体超 低温保存 低温 概 冻存的 细胞学 基础出 超低温 影响向 保存 保存 保存 的遗传 效果 方法 变异 的因素 及检测 第一节概述 种质资源保存:利用天然或人工创造的适 宜环境保存种质资源,使个体中包含的遗 传物质保持其遗传完整性和活力,并能通 过繁殖将其遗传特性传递下去。 ■种质资源超低温保存( Cryopreservation) 是将植物的细胞或组织经过防冻处理后, 在-80℃以下的超低温下保存的方法 极端低温下,活细胞内的物质代谢和生长 活动几乎完全停止。因此,细胞、组织和 器官在超低温保存过程中不会引起遗传性 状的改变,也不会丢失形态发生的潜能。 同时由于超低温条件下,生物的代谢和衰 老过程多大减慢,甚至完全停止,因此可 以长期保存植物材料 意义 可以在有限空间内保存大量资源 与种子保存相比,可以不受时间和高含水 量的限制 与试管苗相比,可以避免频繁继代而带来 的变异,同时节省工作量 用于离体保存的植物材料 愈伤组织、悬浮细胞、胚、花粉和茎尖等 超低温保存的植物种类 超低温保存已涉及到很多植物种类(谷类、豆类 薯类、树木、藻类等等 据王君晖等(1998)统计,目前已有40多个属60多 个种的木木植物被进行了超低温保存试验 在超低温储藏中,植物材料不仅能长期保持形态 发育的潜能,还能保持遗传性状的稳定,适用于 对植物材料进行短、中、长期保存,使迄今唯 的、不需要继代的、可靠的长期保存方法。 随着保存技术的发展,运用复合程序的超低温保 存技术不断涌现,对一些体积较大的组织进行保 存将成为可能,且保存过程对材料的伤害越来越 小。因此,超低温保存技术为种植资源保存提供 了一条新的途径。 第二节植物材料超低温冻存的细胞学基础 细胞内外水的冻结特性 细胞的冷冻致死损伤 、细胞内外水的冻结特性 植物细胞中的水由游离水和束缚水组成,其 中游离水约占90%,很容易冻结 ■理论上讲,细胞外水的冻结温度为-5℃ 15℃,细胞内游离水的冻结在-25℃ 而结合水在-100℃C下也不会冻 根据 Luyet的冻结理论,细胞内游离水的冻 结温度可以认为是细胞冻存的安全温度, 般将-30℃视为一些技术研究的基础温度 控制细胞内外水的冻结状态是细胞冻存技 术的关键 根据细胞内外水的冻结特性选择冻存技术 。逐步冷冻:在细胞中游离水冻结之前,首先使胞 外冻结,从而导致细胞内游离水向胞外渗溢使细 胞适度脱水,因为适度的细胞内脱水对冻存是有 益的 快速冷冻:即玻璃化冻存技术,提高保护剂浓度 加快降温速度,使细胞内水冻结冰晶体积非常小, 出现玻璃状的冻结现象,从而也可使细胞免受伤 害,达到细胞冻存的目的