醋酸纤维维薄膜电泳分离血清蛋白.pptVIP

实验六 醋酸纤维嶙膜电咏分离血清蛋白 【实验目的】 1、了解电泳的一般原理、掌握醋酸纤维素 薄膜电泳操作技术; ■2、掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白的 方法。 【实验原理】 由于各种血清蛋白质的等电点不同, 因此在pH8.6的缓冲液中,各种血清蛋白 质所带电荷量不同,同时由于它们的相对 分子质量也不同,造成电泳迁移率不同, 所以在醋酸纤维薄膜上电泳后,可将各种 血清蛋白质分离开。 血清中含有清蛋白,α-球蛋白、β-球蛋白、Y一球 蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、 立体构象、分子量、等电点及形状不同,在电场中 迁移速度不同。分子量小、等电点低、在相同碱性 PH值缓冲体系中,带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电 场中迁移速度快。 例如,以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清在 PH8.6的缓冲体系中电泳1h左右,染色后可显示5条 区带。清蛋白泳动最快,其余依次为a1-、a2 β-及γ-球蛋白(如图3-5)。 图3-5正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 1为清蛋白,2,3,4,5分别a1,a2,β-及 Y-球蛋白, 6为丿 点样原点 这些区带经洗脱后可用分光光度法定量, 也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带 吸收峰及相对百分比 此法由于操作简单,快速,分辨率高及 重复性好等优点。它不仅可用于分离血 清蛋白,还可用于分离脂蛋白、血红蛋 白及同工酶的分离测定。 【实验材料】