拟南芥生长过程.pdf

拟南芥生长过程 拟南芥生长的适宜温度白天为 22 ℃-24 ℃,夜温最好比日温低 2℃ ,适宜的湿度为 60-70%, 生 长期适宜的光强为 150 μmol ·s-1 ·m-2. 拟南芥在日照长于 12 小时下才会开花 ,一般拟南芥生 长室的日照长度定于 14-16h 为佳。 1．准备发苗培养基 : 1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%. 灭菌后 ,在超净台上分装入培养皿 . 2 ．种子消毒有两种方法： 一种是湿法 NaClO 水溶液消毒 :种子放在 1.5ml 试管中 , 加入 1ml10%NaClo, 混匀 ,消毒 5min, 用无菌水洗 5 次以上 ( 用移液枪吸 ) ，湿法消毒后的种子要马上播； 另一种是干法 8%NaClO 酒 精溶液，此时需用 95% 的酒精来配制 8%NaClO 酒精溶液。在 8%NaClO 酒精溶液中消毒 6-8min 。然后用无水酒精洗种子 5 次以上，吸干无水酒精后，在超净工作台上吹干透后再 密闭保存。 3 ．播种： 对湿法 NaClO 水溶液消毒种子用移液枪将种子吸到培养皿上 ,可多加些水 ,将种子铺均匀 ( 不 要太密 ,太密根缠在一起不好移苗 ), 用移液枪吸干水 ,在超净台上让培养皿干了；对干法消毒 的种子，用无菌牙签将种子点播到培养基上。用 Parafilm 密封盖子后 ,请用牙签或镊子在上 下两处各打 4 个小孔以通气。最好是在每皿 30 株这样的密度下 ,让其生长两周后再移苗 . 4. 移苗及后续管理 : 如果培养基质用花泥，将花泥装入花盆 ,将花盆放入有水的塑料周转框中 ,框中的水就会通过 花盆底部的孔渗上来 ,待花盆中的基质湿透后即可移苗 .小心轻轻用镊子从培养皿中连根取 出小苗 ,把苗种入花泥中 .移苗结束后 ,用保鲜膜覆盖 1-2 天后揭膜， 如果苗很弱， 则在此基础 上还需多覆盖 1 天 .在花泥中种植时，苗期不需要添加营养液，开始抽苔时请及时添加营养 液，一般需要添加 2 次，每次加入 1 升拟南芥营养液， 2 次添加最好间隔一段生长时期 （7-10 天），由于花泥有较好的吸附缓释能力，对间隔时间长短没有严格要求。如果盆栽密度较大 或框中花盆数量较多则需要多加一次营养液。 对于花泥种植来说， 不要在塑料周转框中始终 保持水层 ,一次吸足水分后，可以隔 4-6 天后再加水让其吸足水分，在开始收籽期 ,不再需要 过多的水分 ,可保持塑料周转框干燥 ,此时每隔 7-10 天加一次水即可 . 5 ．收籽 : 在种荚变黄 ,变干时可以收籽 .将种子抖落在纸上 ,用金属滤网过一下以除去杂质 ,将种子装入 写了标记的小纸袋中 ,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后 ,封存于 1.5ml 试管中，切记越 干越好，长期保存的种子必需要干燥保存到 4 ℃。