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1.(2018·重庆调研测试)透明质酸酶在临床上常用作药物渗透剂,目前主要从动物组织
中提取。科研人员尝试将透明质酸酶基因转入大肠杆菌,使其得到高效表达。下图中 Nco
Ⅰ和Xho Ⅰ为限制酶,重叠延伸PCR是一种定点突变技术。据图回答下列问题:
(1)步骤①的目的是为了保护____________,PCR 的原理是____________;PCR扩增的
过程是:目的基因 DNA 受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后
____________,如此重复循环。
(2)若图中的透明质酸酶基因来自cDNA 文库,则在进行步骤②之前需在其前、后端分
别接上特定的__________,否则该基因就不能转录。步骤②需要用____________(酶)切割质
粒。
(3)图中A 是____________;早期实验人员利用大肠杆菌作为受体,后来发现用毛霉或
酵母菌作受体更具优势,从生物体结构角度分析,最可能的原因是____________________。
(4)目的基因导入受体细胞后,是否可以稳定地维持和表达其遗传特性,只有通过检测
和鉴定才能知道。检测转基因生物DNA上是否插入了目的基因的方法是_________。
解析:(1)分析图解可知,图中目的基因的中间存在Nco Ⅰ限制酶的切割位点,因此步骤
①的目的是为了保护透明质酸酶基因,防止Nco Ⅰ限制酶破坏目的基因;PCR扩增的过程是:
目的基因DNA 受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合
酶作用下延伸,如此重复循环。(2)基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标
记基因。启动子位于目的基因的首端,终止子位于目的基因的尾端,因此在进行步骤②之前
需在透明质酸酶基因前、后端分别接上特定的启动子、终止子,否则该基因就不能转录。步
骤②需要用Nco Ⅰ和Xho Ⅰ切割质粒。(3)据图可知,图中A 是基因表达载体,早期实验人
员利用大肠杆菌作为受体,后来发现用毛霉或酵母菌作受体更具优势,从生物体结构角度
析,最可能的原因是毛霉或酵母菌是真核细胞,有内质网和高尔基体加工。(4)目的基因导
入受体细胞后,是否可以稳定地维持和表达其遗传特性,只有通过检测和鉴定才能知道。检
测转基因生物DNA 上是否插入了目的基因的方法是利用目的基因制作成的探针进行DNA
分子杂交。
答案:(1)透明质酸酶基因,防止Nco Ⅰ限制酶破坏目的基因 DNA双链复制 在DNA
聚合酶作用下延伸
(2)启动子、终止子 Nco Ⅰ和Xho Ⅰ
(3)基因表达载体 毛霉或酵母菌是真核细胞,有内质网和高尔基体加工
(4)利用目的基因制作成的探针进行DNA分子杂交
2.(2018·山东、湖北部分重点中学高三模拟)如图所示为培育二倍体转基因抗虫玉米的
两种思路。EcoR Ⅰ、SmaⅠ、BamH Ⅰ为限制酶(箭头所指为酶切位点)。回答下列问题:
(1)据图,获取目的基因时不能选择 Sma Ⅰ的原因是________________________。选择
EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ的优点是可避免目的基因与质粒________连接。
(2)与思路1相比,思路2的最大优点是获得的转基因抗虫玉米________________。
(3)培育转基因抗虫玉米的核心步骤是__________________________,其目的是使目的
基因在受体细胞中____________________________________________。
(4)将重组质粒导入受精卵,采用最多的方法是农杆菌转化法,这跟农杆菌的
________________________________________________________________________有关。
(5)操作⑤常用的方法是________________________。
解析:(1)题图显示:目的基因中存在Sma Ⅰ的识别位点。若使用Sma Ⅰ切割外源DNA,
则会破坏外源DNA 中的目的基因的结构,因此获取目的基因时不能选择Sma Ⅰ切割。EcoR
Ⅰ和BamH Ⅰ的识别位点不同,形成的黏性末端不同,因此选择EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ切割质
粒和外源DNA,其优点是可避免目的基因与质粒反向连接。(2)思路1是将重组质粒导入玉
米的受精卵中,由该受精卵发育成的植株不一定都是纯合子,思路2是将重组质粒导入由花
粉经过脱分化形成的愈伤组织中,由该愈伤组织形成的单倍体幼苗2再经过人工诱导,使其
染色体
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