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(2017·高考全国卷Ⅱ)几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分,几丁质酶可催化几丁质水解。
通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内,可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题:
(1)在进行基因工程操作时,若要从植物体中提取几丁质酶的 mRNA,常选用嫩叶而不选用
老叶作为实验材料,原因是________________________________。提取RNA时,提取液中
需添加RNA酶抑制剂,其目的是________________________________________。
(2)以mRNA为材料可以获得cDNA,其原理是______________________________________。
(3)若要使目的基因在受体细胞中表达,需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体
细胞,原因是_____________________________________________________________(答出两
点即可)。
(4)当几丁质酶基因和质粒载体连接时,DNA连接酶催化形成的化学键是________________。
(5)若获得的转基因植株(几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中)抗真菌病的能力没有提
高,根据中心法则分析,其可能的原因是____________________________________。
解析:(1)在进行基因工程操作时,若要从植物体中提取几丁质酶的 mRNA,常选用嫩叶而
不选用老叶作为实验材料,原因是相对于老叶而言嫩叶组织细胞更容易被破碎。提取RNA
时,提取液中需添加RNA酶抑制剂,其目的是防止RNA降解。(2)以mRNA为材料获得cDNA
的原理是在逆转录酶的作用下,以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA。
(3)若要使目的基因在受体细胞中表达,需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体
细胞,原因是目的基因无复制原点且目的基因无表达所需启动子。(4)DNA连接酶催化形成
的化学键是磷酸二酯键。(5)若获得的转基因植株不具备所期望的性状表现,根据中心法则
分析,其可能的原因是目的基因的转录或翻译异常。
答案:(1)嫩叶组织细胞易破碎 防止RNA 降解 (2)在逆转录酶的作用下,以mRNA为模
板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA (3)目的基因无复制原点;目的基因无表达所需
启动子 (4)磷酸二酯键 (5)目的基因的转录或翻译异常
(2017·高考全国卷Ⅲ)编码蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五个片段组成,
编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成,如图1所示。
回答下列问题:
(1)现要通过基因工程的方法获得蛋白乙,若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序
列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA),则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白
乙,原因是_______________________________________________。
(2)某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D 的过程中,在PCR反应体系中加入了DNA
聚合酶、引物等,还加入了序列甲作为__________,加入了________作为合成DNA 的原料。
(3)现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白,要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T 淋
巴细胞增殖的作用,某同学做了如下实验:将一定量的含T 淋巴细胞的培养液平均分成四
组,其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙,另一组作为对照,培养并定期检测T 淋巴
细胞浓度,结果如图2。
①由图2 可知,当细胞浓度达到a时,添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加,
此时若要使 T 淋巴细胞继续增殖,可采用的方法是________________。细胞培养过程中,
培养箱中通常要维持一定的CO 浓度,CO 的作用是_______________________________。
2 2
②仅根据图1、图2可知,上述甲、乙、丙三种蛋白中,若缺少____________(填“A”“B”“C”“D”
或“E”)片段所编码的肽段,则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。
解 析 : (1) 若 在 启 动 子 的 下 游 直 接 接 上 编 码 蛋 白 乙 的 DNA 序 列
(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA),则转录出的mRNA 上缺少起始密码子,故不能翻译出
蛋白乙。(2)使用 PCR 技术获取 DNA 片段时,应在 PCR 反应体系中添加引物、耐高温的
DNA 聚合酶、模板、dNTP 作为原料。(3)T 淋巴细胞浓度之所以不再
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