第十三章 免疫细胞分离及表面标志检测.ppt

;免疫细胞的分离及检测;第一节 免疫细胞的分离 ;细胞分离基本原理;一、外周血单个核细胞分离 ;原理：外周血中各细胞的比重不同，PBMC的比重为1.075～1.090，红细胞和多核细胞分别为1.093和1.092，选择比重为1.077±0.001的介质，细胞与介质混合后离心，比重比介质大的红细胞和多核细胞沉降在下层，而PBMC位于 Ficoll分离液上层。 ; 用1.077±0.001的分层液可分离人外周血单个核细胞 　;对分离介质的要求：对细胞无毒； 　　　　　　　　　等渗； 　　　　　　　　　与血浆和分离细胞不相溶； 　　　　　　　　　有特定的比重。;方法学评价：分离得到的PBMC纯度可达９５％， 　　　　　　淋巴细胞占９０％～９５％； 　　　　　　操作简便； 　　　　　　易于无菌。 　　　　　　;二 、淋巴细胞分离; 利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平培养瓶，37℃温箱静置1 h，单核细胞将贴附于平皿壁上，而未贴壁的细胞几乎全为纯淋巴细胞。 橡皮棒刮下贴壁的细胞，可得纯单核细胞(无活性）。; 利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex G10的层析柱中，凡有黏附能力的细胞绝大部分被吸附而黏滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。;3. Percoll