分子生物学电子教案第七章.docVIP

第七章 RNA的转录 1．课程教学内容 (1) RNA的转录 概述 （复习遗传学） (2) 原核生物RNA转录后加工 (3) 真核生物转录后加工 (4) RNA的编辑 (5) RNA的反转录 2．课程重点、难点 各种RNA聚合酶的启动子结构、转录的过程、转录的后的加工、RNA编辑。 3．课程教学要求 （1）掌握细菌和真核生物RNA聚合酶特点和功能、启动子的结构特点和分类； （2）掌握和理解细菌和真核生物转录起始，了解转录的调控； （3）掌握和理解RNA的加工方式和各种RNA的加工机制； （4）了解RNA的修饰和RNA的反转录。 一、??????? 概述 DNA分子所储藏的蛋白质遗传信息,必须转变成信使RNA分子，才能到达蛋白质合成的工厂—核糖体，然后蛋白质合成酶系才能把mRNA所带来的信息翻译成蛋白质。 转录是以DNA为模板，在依赖于DNA的RNA聚合酶催化下，合成RNA的过程。 转录是基因表达的第一步，也是关键的一步。生物体基因表达的调控的第一步也就是决定是否该基因表达。对于大多数基因来说，这是最重要的调控机制，在有些情况下甚至是唯一的调控机制。对于任何一个连锁的过程，控制其第一步是最为有效的和最为经济的。 转录的过程，要涉及到两个方面：一是RNA合成的酶学过程，二是RNA合成的起始信号和终止信号，也就是DNA分子上的特定序列。 DNA和RNA的碱基的序列，方向总是从5’-3’，除非特别说明。这而要对转录时DNA两条链的作规定：把不作模板转录的链称为有义链(sense strand)，又称为编码链(coding strand)；而把作为模板转录的链称为反义链(antisense strand)或模板链（template strand）。这样有义链的方向和核苷酸序列都与这一区域转录出来的RNA序列一致（只是T和U的区别而已）。 对于单链DNA噬菌体（φx174），其DNA进入寄主细胞后必须复制出一条互补链而成为双螺旋的形式，才能从这条互补链上转录出它所需要的RNA。这样，这条互补链称为反义链，又称为负链；而能够进入噬菌体颗粒的DNA链称为有义链，又称为正链。对于单链RNA病毒，如其基因组RNA能够作为m热闹啊相同，则该RNA病毒称为正链病毒。若基因组RNA进入RNA寄主细胞后必须通过RNA复制，产生出互补链作为mRNA，则这种RNA病毒就称为负链RNA病毒。 二、???????? RNA合成的酶学 （一）RNA合成的基本特征 1．RNA的前体是四种核糖核苷三磷酸；ATP、GTP、CTP和UTP。在每一个NTP上，有二个-OH，一个在2-C上，一个在3-C上。 2．RNA链的生长方向也是从5-3，核苷三磷酸加到新生链的3端，同时除去一分子焦磷酸而生成磷酸二酯键。焦磷酸又可分解为无机磷，从而推动反应向聚合方向转移。 3．转录必须一条DNA链为模板，按照碱基互补的原则进行转录。 4．RNA聚合酶与DNA聚合酶不同，RNA聚合酶能起始一条新链的合成，起始的核苷酸一般是嘌呤核苷三磷酸，而且将在RNA链的5’末端保持这一三磷酸基团。 RNA合成主要包括四个步骤：（1）RNA聚合酶结合于DNA上特定位点；（2）起始；（3）链的延长；（4）链的终止和释放。 （二）E.coliRNA聚合酶 E.coliRNA聚合酶由五个亚基组成，即α2ββ’σ。α、β、β’、σ四种亚基的分子量分别是基因 rpoA、rpoB、rpoC?和rpoD的产物。有时还可以看到与RNA聚合酶相结合的一个很小的蛋白质，叫做ω亚基，其功能尚不清楚。 在RNA聚合的一定阶段。σ亚基将从整个的酶分子上解离下来。α2ββ’σ这样的整个酶分子称为全酶，而σ亚基解离后的其余部分称为核心酶。当我们讲RNA聚合酶时即意味着全酶，σ亚基最主要的功能是识别启动子，特别是启动子上的R位点。 RNA聚合酶仅仅是复杂的转录机构的核心部分。除了RNA聚合酶之外，还需要其他一些辅助的蛋白质因子。 （三）真核生物RNA聚合酶 真核生物细胞中有三种RNA聚合酶，即RNA聚合酶Ⅰ、聚合酶Ⅱ、聚合酶Ⅲ。这些名称是依据他们从DEAE-纤维素柱上洗脱的先后顺序而测定出来的，后来发现不同的生物的三种RNA聚合酶的洗脱的先后顺序并不相同，因而改用不同的RNA聚合酶对于α-鹅膏毒蕈碱的敏感性不同来区别。RNA聚合酶Ⅰ基本不受α-鹅膏毒蕈碱的抑制；RNA聚合酶Ⅱ对于α-鹅膏毒蕈碱敏感；RNA聚合酶Ⅲ敏感性介于Ⅰ、Ⅱ之间。RNA聚合酶Ⅰ聚合酶Ⅰ存在于核仁中，其功能是合成5.8srRNA、18srRNA和28srRNA；RNA聚合酶Ⅱ存在于核质中，其功能是合成mRNA以及snRNA；RNA聚合酶Ⅲ存在于核质中，其功能是合成5srRNA和tRNA以及转录Alu序列。（表解） 此外