《免疫学检验技术》 5.时间分辨荧光免疫测定 17.4时间分辨荧光技术.pptx

第十七章 荧光免疫技术教学目标知识目标1.熟练掌握：荧光抗体的制备及荧光抗体技术（重难点）。2.掌握：常用的荧光物质，时间分辨荧光免疫测定（重点）、荧光偏振免疫测定。3.了解：荧光的基本知识、免疫芯片技术。能力目标1.掌握：荧光抗体技术标本的制作。2.学会：荧光抗体染色与结果判断。思政-素质目标责任心、质控、生物安全意识、临床免疫学思维本章要点荧光免疫技术的基本原理荧光的基本知识荧光抗体染色的方法及其原理荧光抗体的制备荧光免疫测定的类型及其原理免疫荧光技术在医学检验中的应用一四荧光免疫显微技术荧光免疫技术基本知识概述荧光偏振免疫测定五二三六时间分辨荧光免疫测定免疫芯片技术四（time resolved fluoro-immunoassay, TRFIA） 时间分辨荧光免疫测定时间分辨荧光免疫检测系统时间分辨荧光免疫测定（time resolved fluoro-immunoassay, TRFIA） 用镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨技术相结合而建立的一种新型超微量物质免疫分析方法，具有灵敏度高、特异性强、发光稳定、自然荧光干扰少、标准曲线范围宽等特点，已在临床实验中广泛应用。一、基本原理AgEu3＋/AbEu3＋+ Ag/AbAgEu3＋-Ab/AbEu3＋-Ag检测?Ab/Ag 荧光寿命长：10μs-1000μs，时间差— 时间分辨 Stokes位移大：270nm，易分辨长寿命荧光短寿命荧光时间分辨Eu3+元素的stokes位移 二、方法类型12 3双抗体夹心法固相抗体竞争法固相抗原竞争法激发增强液EuEu双抗体夹心法Eu标记Ab待检Ag固相Ab每一步均需洗涤Eu解离发光增强液固相抗体竞争法AgEu3+荧光强度与待检抗原含量成负相关激发固相AbAg？增强液固相抗原竞争法固相Ag荧光强度与待检抗原含量成负相关激发AbEu3+Ag？三、方法评价 灵敏度高：最小检出量10-18mol/L 分析范围宽：4～5个数量级 标记物稳定：有效使用期长 测量快速，易自动化 易受污染，本底增高四、临床应用 广泛用于微量或超微量物质的检测，如各种激素（肽类激素、甲状腺激素、类固醇激素等）、蛋白质、酶、药物、肿瘤标记物及病毒抗原等的测定。