土壤中分解尿素细菌分离和计数上课用.pptVIP

课题2袭生物培芹5应闭 土爆中分象烟克均续官的分言和计数 课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之 后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2l2+HO脲酶 →NH3+Co2 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌,某些真菌和放线菌 也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竞含有多少这样的细菌 研究思路()筛选菌株 统计菌落数目 白设置对照 (筛选菌株 1、实例: DNA多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外 将少量DNA大量复制的技术,此项技术要求使 用耐高温的DNA聚合酶(930C)。 问:如果请你寻找这种耐高温的酶,你会去 哪里寻找? 启示:寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求,到相应的环境中去寻找。 水生耐热细菌Taq:美国科学家布鲁克于1966 年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现,并分 离出耐高温的 TaqDNa聚合酶。 问:为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来? 原因:因为热泉温度70~80°C,高温淘汰 了绝大多数微生物(不耐热),只有Taq细菌 被筛选出来。 【研究思路】 (一)筛选菌株 原理:有选择作用 人为提供有利于目的菌株生长的 条件(包括营养、温度、PH等), 同时抑制或阻止其他微生物生长。 2、实验室中微生物的筛选原理: 要分离一种微生物,必须根据该微生物的特点 包括营养、生理、生长条件等;配置合适的培养基 方法 (1)抑制大多数微生物生长 (2)造成有利于该菌生长的环境, 结果:培养一定时间后,该菌数量上升,再通过稀释 涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基: KH,PO4 1.4g Nah POa 21g MgO7H2O‖ 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类?从功能上属 于哪类培养基? 固体培养基选择培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源? 碳源:葡萄糖、尿素氮源:尿素 4、该培养基如何将分解尿素的细菌选择出来? 培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生 物才能利用尿素作为氮源而生存。 缺乏脲酶的徼生物由于不能分解尿素,缺乏 氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用 此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 选择培养基:在微生物学中将允许特定 种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类 微生物生长的培养基 对设计实验的训练 组别 培养基类型 是否涂 布接种 目的 实验组以尿素为唯一氮源是 分离尿素细菌 的选择性培养基 牛肉膏蛋白胨 对照组培养基 用以判断选择性培养 是基是否具有选择性