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实训十七、 羊的胚胎移植技术 一、实训目的 通过应用激素对羊进行超数排卵及同期发情处理,以及手术法采胚、检胚、移植全过程的实习,师生可以共同准备并完成羊胚胎移植全过程的操作,让学生练习超数排卵、同期发情、人工授精和本交配种、手术采胚、移植、胚胎鉴定和冲胚液配制等基本操作,基本掌握动物胚胎移植程序的主要技术环节操作要领。 实训十七、 羊的胚胎移植技术 二、材料与器械 1.选择健康、营养良好、无繁殖疾病、生殖功能正常的母羊,做供体羊和受体羊。 2.药品:PMSG、FSH、LH、PGF2α、静松灵注射液、普鲁卡因注射液、PBS冲卵液、胚胎保存液、抗菌素等。 3.器械:羊用冲卵管、注射器、输胚器、连续变倍体视显微镜、腹腔镜、集卵杯、吸卵管、羊手术台(2个)、手术刀柄(片)止血钳、持针钳、肠钳、帕巾钳、剪、镊子、创布、缝合针等两套。 三、方法步骤 1.同期发情与超数排卵处理 (1)绵羊超排方案 (2)山羊超排方案FSH+CIDR+PG法 在供体羊发情周期的任何一天(0天),在母羊阴道内子宫颈口外放置CIDR或海绵栓,第9天更换新栓,第13-15天开始减量注射FSH 4天,第6次注射FSH时注射PG 1 支,第7次注射时撤栓。 2.发情鉴定和配种 用试情公羊(带试情布或结扎输精管)进行试情,试情公羊和母羊的比例1:40~50。被公羊追逐的母羊不躲闪、能站定接受爬跨者定为发情。 FSH注射完毕后,每间隔6小时~8小时试情,试出的发情供体立刻注射促黄体素100单位,或注射促排3号0.2微克后进行本交配种,12h后复配。受体羊发情不配种,等待与其发情同期的供体羊的胚胎。 3.手术法子宫角冲胚 由于羊无法进行直肠检查,手术前应用腹腔镜技术检查供体和受体的卵巢和子宫,将超排反应好的供体羊进行冲胚手术。将供体羊麻醉后,在腹中线或腹侧作一切口,牵出子宫角,用直头止血钳在一侧子宫角体部扎一小孔插入采胚管,使采胚管前端伸向子宫角前段1/2处~1/3处。拔出采胚管内芯,向采胚管的气囊注入4毫升~6毫升空气,将采胚管固定在子宫腔内。 套管针从子宫角中段向宫管结合部方向扎进子宫腔,边退套管针的内芯针边进套管,避免扎穿子宫壁。用小血管夹将宫管结合部夹住,避免冲卵液流向输卵管。用吸有50毫升冲卵液的注射器接套管,匀速推入冲卵液30毫升~50毫升冲洗子宫角,胚胎随冲卵液经过采胚管回收到集卵杯中。推完冲卵液后再打入10毫升空气,然后放掉气囊空气,撤出采胚管、小血管夹、套管针。同法操作另一侧子宫角。 4.检胚及胚胎鉴定 将集卵杯置于显微镜下,放大10倍~20倍,沿集卵杯底部的方格检胚。胚胎一般沉于底部,是外层有透明带的球形体,它在冲卵液中的折光性较其它不规则组织碎片强,色调灰色,直径140微米~185微米。发现胚胎后,用吸胚管将胚胎移到无菌培养皿内的保存液中进行质量鉴定。 5.移植 将经过鉴定的胚胎移植到卵巢上有正常黄体的受体羊子宫角内。 6.手术后处理 供体要注射PG0.1~0.2mg,消除黄体,发情后可配种。 四、实训报告 1.总结手术法和胚胎移植的程序和主要技术环节。 2.填写附件表格内容。
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