2.2.1动物细胞培养及核移植技术.ppt

◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？ ◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（MⅡ中期）为什么？ ◆激活方法： ◆激活目的： ◆促融方法：电刺激 ◆胚胎移植至代孕受体内 妊娠、分娩 体细胞核移植流程 供体：优质高产奶牛 受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养） 1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 有人说它三个母亲，对吗？ 细胞核核移植 电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎 卵母细胞采集、培养 MⅡ期卵母细胞 供体牛 供体细胞注入去核卵母细胞 代孕母牛 克隆牛 体细胞培养 去核卵母细胞 去核 胚胎 移植 体细胞核移植过程（体细胞克隆动物） １、核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植动物的核遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型 3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。 　　在体细胞克隆羊“多莉”培育成功之前，胚胎细胞核移植技术已经有了很大的发展。实际上，“多莉”的克隆在核移植技术上沿袭了胚胎细胞核移植的全部过程，但这并不能减低“多莉”的重大意义，因为它是世界上第一例经体细胞核移植出生的动物，是克隆技术领域研究的巨大突破。这一巨大进展意味着：在理论上证明了，同植物细胞一样，分化了的动物细胞核也具有全能性． 4.动物克隆实例很多，为何多莉就举世闻名呢？ 2.体细胞核移植技术的应用前景 你还在为身体有残疾而苦恼吗？你还在为器官移植找不到合适的供体而焦虑吗？不能在这样下去了，看看我们的体细胞核移植技术吧，只需要从你身上取一个小小的体细胞，通过核移植培养出胚胎干细胞，再用胚胎干细胞诱导分化出各种组织器官，这样的器官的组织相容性抗原跟你的一摸一样，用这样的器官进行器官移植，根本就不会发生免疫排斥。不夸张的说，如果这项技术研究成熟了，以后大家换条胳膊换条腿就跟给汽车换个轮胎一样。你听明白了吗？这不是天方夜谭，巨大的前景就在眼前，你还在等什么？现在，对，就是现在，赶紧加入到生命科学的研究中来吧！ 广而告之： 1、卵母细胞从哪来？——屠宰场废弃的卵巢中采集到卵母细胞，体外培养到减数二次分裂中期。 2、如何去除细胞核？——用微型吸管吸去卵母细胞核和第一极体，也可用射线或某些化学药物等处理细胞破坏受体细胞核。 3、对供体牛有何要求？——优良品种 4、克隆动物的过程中实际有哪些技术支持？——动物细胞培养、核移植、胚胎移植 5、克隆牛的性别和主要性状与哪头牛相同？为什么？——性别和主要性状都与供体牛相同，因为哺乳动物的性别是由性染色体组成决定，克隆牛的染色体全都来自供体牛，因此相同；主要性状由细胞核中遗传物质决定的，因此也与供体牛相同。 6、克隆牛的性状与供体牛完全相同吗？为什么？——不完全相同，一方面去核卵细胞质中带有少量的DNA，其控制的性状与供卵的细胞相同；另一方面，生物的表现型是由基因型与环境因素共同作用的结果，环境不同，表现型也可能不同。 7、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？——因为动物细胞培养在10代以内一般能保持正常核型，而传代到10代以上，则有可能出现变异的核型，遗传物质发生改变，不利于全能型的表现。 * 植物组织培养 植物体细胞杂交 1.动物细胞培养 2.动物细胞融合 3.制备单克隆抗体 4.细胞核移植 回顾： 动物细胞工程常用的技术手段： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 动物细胞工程的基础 就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后,放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 1、动物细胞培养概念： 2、原理：细胞增殖 定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 （贴壁生长长成单层细胞。 有接触抑制现象）。 ①原代培养 3、过程 原代培养 增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养 去掉组织间 蛋白 加培养液 强调一：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 细胞的接触抑制 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液