生物化学课件：10第十四章 DNA的生物合成2.ppt

端粒酶靠其hTR（AnCn）x 辨认及结合母链DNA（TnGn）x的重复序列并结合至其3’端，并发生移位。 端粒酶以hTR（AnCn）x 为模板，以逆转录的方式复制延伸母链 端粒酶的RNA 端粒DNA末端 内在模板RNA 端粒酶的RNA 端粒酶的RNA DNA-Pol 端粒酶靠其hTR（AnCn）x 辨认及结合母链DNA（TnGn）x的重复序列并结合至其3’端，开始以逆转录的方式复制延伸母链。 复制一段后，hTR（AnCn）x 爬行移位至新合成的母链3’端再以逆转录的方式继续复制延伸母链。 延伸至足够长度后，端粒酶脱离母链，代之以DNA-pol，此时母链形成非标准的G-G发夹结构允许其3’-OH反折，同时起引物和模板的作用，在DNA-pol的作用下完成末端双链的复制。 逆转录和其他复制方式 第五节 逆转录( reverse transcription ) 逆转录酶 一、逆转录病毒和逆转录 逆转录：就是以RNA为模板，由逆转录酶催化4种dNTP聚合、产生DNA的过程，又称RNA指导的DNA合成。 逆转录病毒：又称反转录病毒，是RNA病毒的一种，它们的遗传信息不是存录在DNA，而是存录在RNA上，此类病毒多具有逆转录酶。 是多功能酶，有三种酶活性： RNA指导的DNA聚合酶活性 RNase H活性 DNA指导的DNA聚合酶活性 逆转录酶( reverse transcriptase ) 全称：依赖RNA的DNA聚合酶 逆转录的过程 RNA 模板 逆转录酶 DNA-RNA 杂化双链 逆转录酶( RNase ) 单链DNA 逆转录酶 双链DNA 逆转录研究的意义 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明： 至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 小 结 复制特点： (3个) 半保留复制 2. 双向复制 3. 半不连续复制 原核生物与真核生物参与复制的关键酶 原核生物 真核生物 拓扑异构酶 SSB DnaC DnaB（解螺旋酶）、 DnaA、 引物酶 连接酶 DNA pol Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 拓扑异构酶 RPA 解螺旋酶: DNA-Pol δ 引物酶: DNA-Pol α 连接酶 DNA pol ?、?、?、?、? DNA聚合酶活性（作用）（2方面） 1、聚合活性： 5? ? 3?方向，催化四种dNTP一个一个地连接到DNA子链上去。 2、核酸外切酶活性（两种情况） 3? ? 5?外切酶活性，能辨认错配的碱基对，并将其水解。 5? ? 3?外切酶活性，能切除突变的 DNA片段。 原核生物与真核生物的DNA聚合酶 原核生物 真核生物 DNA pol Ⅲ 核心酶：聚合、校正 γ-复合物 DNA夹子 DNA-pol ?、 DNA-pol ? DNA-pol ?： 校读、修复和填补缺口 复制引发和延伸过程中发生 DNA聚合酶?/?转换 DNA-pol Ⅱ： DNA pol Ⅰ： 校读、修复和填补缺口 参与DNA损伤的应急修复 DNA-pol ?（Ⅱ）： 参与应急修复 原核生物： DNA-pol Ⅲ 真核生物： DNA-polα和δ 复制中起主要作用的DNA聚合酶 DNA生物合成过程 起始：解螺旋、形成复制叉、引发体、引物 延长：半不连续复制、冈崎片段 终止：切除引物、填补空缺、连接切口 原核生物与真核生物复制起始的比较 原核生物 真核生物 拓扑异构酶 SSB DnaC DnaB（解螺旋酶）、 DnaA、 引物酶 拓扑异构酶 解旋酶（多种） RPA ?SSB Pol ?/引物酶 只有一个复制起始点； 打开双链形成复制叉, 形成引发体，合成RNA引物 多复制起始点,且起始片段较短； 打开双链形成复制叉, 形成引发体，合成引物RNA-DNA; 复制有时序性； 原核生物与真核生物复制延长的比较 原核生物 真核生物 DNA pol Ⅲ 核心酶：聚合、校正 γ-复合物 DNA夹子 DNA聚合酶?/? 复制因子C（RFC) 增殖细胞核抗原（PCNA） 复制引发和延伸过程中发生DNA聚合酶?/?转换； 多复制子复制，引物和冈崎片段都比原核生物短。 半不连续复制，一个DNA聚合酶能够同时合成前导链和后随链 原核生物与真核生物复制终止的比较 原核生物 真核生物 切除引物： RNA酶/DNA-Pol I 填补空缺：DNA-Pol I 连接切口：DNA连接酶 切除引物：RNA酶、核酸外切酶 填补空缺：DNA-Pol δ/ ? 片段