植物染色体倍性分析实用文档[文字可编辑].ppt

应用专家： landinsky@163.com 植物染色体倍性分析、基因组大小分析 Partec 染色体倍性分析仪在 植物研究中的应用 植物学研究中 Partec 倍体分析仪的应用 植物的核 DNA 含量和倍性水平是植物学研究中的基础研究指标。 对植物种质资源鉴定 、种群进化、物种分类、生态学研究、多倍体育种、单倍 体育种、多倍体诱导等多方面都具有重要意义。 植物学研究中 Partec 倍体分析仪的应用 生物体的单倍体基因组所含 DNA 总量称为 C 值。 C 值是种群进化、物种分类和生态 学研究的有利分析工具和证据。 由于近缘物种的 C 值极为相似，因而可以通过 C 值获取基因组大小这一特征信 息，用于构建物种的系统进化树，分析亲缘关系，同时可以通过测定 C 值来鉴定 杂交物种。 借助 C 值与气孔保卫细胞长度、面积正相关的规律，通过测量植物化石的气孔长 度和面积，可以用已知参考样本物种的 C 值推断出相应的古植物 C 值，用于古植 物研究。另外，外来入侵种比同域分布的同属其它种有较小的 C 值，因此可以预 测入侵能力的强弱，并以此作为生态学评估指标。 植物学研究中 Partec 倍体分析仪的应用 植物染色体组多倍化是促进物种形成的重要因素之一，大部分开花植物的祖先 都经历过一轮或者几轮多倍化。植物类群染色体倍性对研究植物系统进化，澄 清植物的物种起源模式有科学研究价值。 鉴定染色体倍性是植物单倍体育种的必要环节，例如在花药单倍体育种实验 中，再生组织可能是纯单倍体，也可能是混倍体。还可用于多倍体育种，多倍 体育种是利用人工诱变或自然变异等，通过细胞染色体组加倍获得多倍体育种 材料，用以选育人们需要的优良品种，也需要鉴别是否诱导加倍成功。 此外，植物倍性鉴定还可用于分析细胞分裂活动等植物发育研究。 植物学研究中 Partec 倍体分析仪的应用 在植物细胞研究中还可以分选出活的原生质体，并通过分选出来的原生质体再 生出植株，其中最有意义的就是选出由原生质体融合所产生的异核体。对酸橙 (Citrus aurantium L ． ) 叶肉原生质体和甜橙 (C sineniscv ． Shamouti) 胚性愈 伤组织原生质体电融合后再生的体细胞杂种进行分析，结果表明，所有的体细 胞杂种植株荧光强度是二倍体对照的两倍，这说明两者的原生质体已经融合。 倍体分析的传统方法 — 染色体计数与分析 ? 实验方法与步骤 ? 取每个再生株根部刚发出的小于 1 cm 的根 5 ～ 6 条立刻放入饱和对氯二苯溶 液中，常温下放置 4 h 后，转入卡诺 (Camoy s) 固定液固定 24 h ，取出的根 用蒸馏水冲洗两遍后转入 1 mol ／ L 盐 酸溶液， 60 ℃ 水浴中解离 6 ～ 7 min ， 然后在蒸馏水中浸泡 10 min 以上。用 卡宝品红染色压片，奥林巴斯显微镜 (BH — 2)400 倍下观察根尖细胞染色体 并计数，每个再生株观察 5 条根。荧 光显微数码摄像系统即时拍照成像。 实验结果 倍性分析与流式细胞术 流式细胞分析，又称流式细 胞术（ FCM ），是以高能量 激光照射高速流动状态下被 荧光色素染色的单细胞或微 粒，测量其产生的散射光和 发射荧光的强度，从而对细 胞（或微粒）的物理、生理、 生化、免疫、遗传、分子生 物学性状及功能状态等进行 定性或定量检测的一种现代 细胞分析技术。 特点： （ 1 ）单细胞分析。（ 2 ）快速分析。（ 3 ）多参数相关测量。（ 4 ）定性 或定量分析细胞。（ 5 ）统计学意义明显。 （ 6 ）分选。 嵌入性染料 荧光染料 DAPI ，直接与细胞内的 DNA 双螺旋结构中的 A-T 碱 基对结合，从而使细胞在激发光的照射下发特定波长的光，通 过判断发射光的强弱来推算 A-T 碱基对的多少，从而得知 DNA 的倍性关系。 信号检测与分析 当细胞携带荧光素标记物，通过激光照射区时，受激光激发，产生代 表细胞内不同物质、不同波长的荧光信号，这些信号以细胞为中心， 向空间 360 度立体角发射，产生散射光和荧光信号 , 下图是以激发光光 源波长 488nm 为例的示意图： 荧光信号的线性测量 线性放大： 即放大器的输出与输入是线性关系，细胞 DNA 含量、 RNA 含量、总蛋白质含量等的测量一 般选用线性放大测量。 在倍体分析实验中，待测 样本的倍性（荧光强度）为标样的整数倍，在测 量时一定选择线性放大。 倍体分析仪数据的显示－－－直方图 横坐标， X 轴 表示光强度，强度高的光信号靠右 侧显示。 纵坐标， Y 轴 表示数量累计，相同强度的光信号 在同一横坐标点（通道）内向 Y 轴方 向累计。 DNA-DAPI 倍体分析仪测试流程 倍体分析方法比较 染色体计数法 ? 实验操作复杂 ? 耗时长、检测