生物化学 蛋白质的理化性质 蛋白质的理化性质.pptx

江苏医药职业学院生物化学临床医学专业教学资源库系列课程基础医学部 生理生化教研室 潘艳老师蛋白质的结构与功能蛋白质的分子组成01蛋白质的分子结构蛋白质结构与功能的关系02目录蛋白质的理化性质0304请更换Logo 蛋白质的理化性质及其分离纯化一、蛋白质的理化性质 蛋白质是由氨基酸组成的大分子化合物，其理化性质也有一部分又不同于氨基酸，如高分子量、胶体性质、沉淀、变性和凝固等。一部分与氨基酸相似，如两性电离及等电点、紫外吸收、呈色反应等。蛋白质的等电点（pI）蛋白质的两性电离及等电点 在某一溶液中，蛋白质所带正负电荷相等，净电荷为零时，此时该溶液的pH值即为该蛋白质的等电点 (isoelectric point，pI )。蛋白质的吸收光谱及几种呈色反应蛋白质的特征紫外吸收光波长—280nm （Trp、Tyr的贡献）2. 呈色反应——常可用于蛋白质定量双缩脲反应(Biuret Reaction)两个或两个以上的肽键在碱性条件下与Cu2+反应生成紫红色物质Folin-酚试剂反应蛋白质分子中的Tyr在碱性条件下与酚试剂生成蓝色化合物茚三酮反应蛋白质分子中的游离氨基和羧基与茚三酮加热生成蓝紫色化合物蛋白质的胶体性质 蛋白质分子量颇大，可自一万至百万之巨，故其分子的大小已达到胶粒1～100nm范围之内。因此蛋白质溶液具有胶体溶液的性质。稳定该亲水胶体的因素是：水化膜、颗粒表面电荷。蛋白质的变性----吴宪最早提出 天然蛋白质在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间结构被破坏，从而导致理化性质改变和生物学活性的丧失，称为蛋白质的变性作用(denaturation)。变性主要是二硫键及非共价键的断裂，并不涉及一级结构氨基酸序列的改变。 变性因素：加热、有机溶剂、强酸、强碱、重金属等蛋白质的沉淀 蛋白质变性后，疏水基团暴露，相互之间容易聚集而发生沉淀。值得注意的是，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。蛋白质变性的应用：利用：高温、高压灭菌利用：低温保存酶、疫苗等，防止蛋白质变性。 变性并非是不可逆的变化，当变性程度较轻时，如去除变性因素，有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的构象及功能，变性的可逆变化称为复性（renaturation）。蛋白质的分离和纯化盐析（salt precipitation）：中性盐（硫酸铵等），分段盐析有机试剂沉淀：乙醇、丙酮，低温 免疫沉淀：抗原-抗体电泳(electrophoresis) :pI分子量的大小离心、超速离心(ultracentrifugation)：沉降系数S层析（chromatography）：离子交换层析、亲和层析、凝胶柱层析 透析（dialysis）： 半透膜盐析 将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐加入蛋白质溶液中，中和蛋白质颗粒表面所带的电荷，破坏其水化膜，导致蛋白质在水溶液中的稳定因素被去除而沉淀。电泳带电荷的蛋白质等质点能够在电场中向相反的方向泳动，称为电泳。藉此可以使蛋白质等得到分离。电泳（electrophoresis）双向凝胶电泳技术透析技术层析chromatography 凝胶柱层析 离子交换层析 亲和层析超速离心感谢聆听更多模板请关注：