线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验(MCAO模型)的经验最新.pdfVIP

线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO 模型）的经验 本人现在正在做线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO 模型），这方面的资料我查了一些，这个实验我也作了一段 时间，不敢说很专业了，不过现在基本上我能在15min 左右完成手术，而且手术过程中不出一滴血，造模后缺血程度 基本一致。虽然前面有很多前辈发了很多MCAO 的很专业的贴子，不过我觉得比较凌乱，现在我把我的心得体会和以 前的贴子的精华部分奉献给大家，希望这会对将要做这个实验的朋友有一丝的帮助。虽然做实验总会有郁闷的时候， 不过风雨之后总会见到彩虹的，这可以也是我的心得体会。衷心祝福大家能把实验做的成功、完美！ 实验前准备 麻醉剂：水合氯醛（应较好的控制大鼠体温） 保温：60W 白炙灯高度为37cm 直接照射能使肛温保持在37℃ 栓线的制备： 1.取熔点为56℃的固体石蜡一块，在瓷杯中加热熔化。直径为0.24mm、长5cm 的鱼线一端5mm 长的一段，垂直在熔 化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面，其直径为0.26mm 。就这样， 普通的鱼线即可变成规相一致头端光滑圆钝的栓线。 2.在鱼线18mm 的位置用涂改液标记一个白色点。 TTC 的配制：用0.2mol/L 磷酸缓冲液（PBS ）配成2%TTC 溶液（pH7.5 ），避光保存 体重与栓线直径：线栓直径0.24mm 采用的SD 大鼠，体重250-300g 。 实验方法： 动物用10％水合氯醛（35mg/kg ）腹腔注射麻醉。仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜， 分离左侧颈总动脉（CCA ）、颈外动脉（ECA ）和颈内动脉（ICA ），在CCA 远心端和近心端及ECA 处挂线备用。 用微动脉夹暂时夹闭ICA ，然后近心端结扎CCA、ECA 。然后在距CCA 分叉部4mm 处剪一小口，将拴线插入到 ICA ，这时用绕在CCA 远心端的细线轻轻系牢拴线。（不可过紧，否则进线困难，但松了又会出血。）用眼科镊轻推 拴线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度在18 mm 时 （一定要将血管放松至原来状态, 且保证标记点在分叉处, 由 于标记的是白色的所以很容易看的），紧紧系牢CCA 远心端的细线，此时的关键是动作轻柔，不要使ICA 有任何的 牵拉，否则栓线会脱出ACA ，可能会造成缺血失败。血管外的栓线不要留得过长，更不要缝在皮外，大鼠醒来后会自 己拔出。缝合伤口，单笼饲养观察。如果需要再灌的话，就把拴线抽出即可，因为脑底有个动脉环，结扎一侧颈总动 脉大脑不会缺血的。 注意事项： 1．分离时要层次清楚：正中剪开SD 大鼠颈部皮肤，分离皮下结缔组织时会发现该组织与颈部两侧鼓泡腺体 （很多人 误认为那是甲状腺）结合紧密，因此不必分离过于太细，直接在正中两侧鼓泡腺体之间分离，这样能不接触胸锁乳突 肌而直接暴露颈前颈群且不会损伤腺体造成过多出血。下一步是分开颈前肌群，这时候要注意用小钳子作撑开分离动 作要在左右肌肉块之间而不是一块肌肉的肌纤维之间，虽然它们看起来很模糊，但这样能保证不会出现较多条索状细 肌纤维条影响下一步颈内动脉的寻找与分离，并且能整块地向一侧牵开颈前肌群暴露颈动脉鞘。见到颈动脉鞘了则要 注意细致分离迷走神经，若损伤则可能影响其呼吸而死亡的。 2.分离血管时，要尽量将血管剥离的干净些，这样在用眼科剪剪口时就不会误剪外膜（误剪的话再剪就很容易把口剪 大了或者剪断了，要注意口子越小越好插线），且要剪一个斜行的切口（眼科剪与血管约成45 度），这样在血液刚流 出时仍能看上翻的断口管壁，这样即容易插入栓线且血管受得了插线时一定的牵拉。当然，切勿牵拉过猛，以免使血 管发生痉挛，导致栓线不能顺利进入。 3.注意尽量不要损伤在颈内颈外分叉下的交感神经节。 4. 如果你用的是中长效麻醉剂，插线成功后，固定丝线，然后让其俯卧位，而且稍稍抬高其颈部，才能确保模型成功。 5. 栓线进入后颈内动脉后即可逐渐插入了，有时候很顺利一插到底，但有时候在中间就怎么也进不去了，这是因为在 血管入颅穿过颅骨时有一个狭窄或者角度。因此，碰上这种明显阻力时，一定不能盲目向前使力插，越插栓线前端变 形越进不去且容易损伤血管。这时候正确的作法是往外抽出较多栓线，也许会有一定的动脉血流出，不必慌，只要顺 着血管走行调整一下进线角度轻柔的使劲，一般都能进去，反复试几次还不行最好换根栓线，很可能前端也经变形角 度变了！颈内动脉的走向为内上方，可以用眼科镊夹住鱼线插，但进去后要注意，别太用力，要不血管就要破了。 6. 栓线不能在血管里反复进退，否则及容易造成蛛网膜下腔出血，而且很容易误