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蛋白质的提取与鉴定 一、实验相关知识 一、实验相关知识 1、实验原理 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小，所带电 二、血红蛋白的提取 荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等， 可以分离不同种类的蛋白质。 三、乳酸脱氢同工酶的提取 2 、分离方法：凝胶色谱法 c. 凝胶色谱法的原理——分子筛效应 当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的 a. 概念：是根据被分离的蛋白质相对分子质量的大小，利用具 蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对 有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离的方法。 分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移 动，路程较短，移动速度较快.相对分子质量不同的蛋白质分子因此 b. 凝胶：大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖） 得以分离。 构成的多孔小球体，小球体内部有许多贯穿的通道。 依据的特性是：蛋白质分子量的大小 1 一、实验相关知识 3 、鉴定方法：电泳 2 、分离方法：凝胶色谱法 a. 概念： c. 凝胶色谱法的原理——分子筛效应 指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 b. 原理： 许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基 团，在一定pH 下，这些基团会带上正电或负电.在电场的作用下 ，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子 本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从 而实现样品中各种分子的分离。 c. 分类： SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 常用的有琼脂糖凝胶电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中迁移率取决于它所带静电荷的多少以 鉴定蛋白质的纯度，以及测定蛋白质的相对分子质量通常用 及分子的大小等因素。 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入SDS。 ）。 SDS 能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体