羊骨胶原肽—钙螯合物的酶解—发酵法制备及其结构表征和相关性质分析.pdf

羊骨胶原多肽-钙螯合物的酶解-发酵法制备及其结构表征和相关性质分析 摘 要 - 本研究以羊骨粉为原料制备羊骨胶原多肽 钙螯合物。以游离钙含量为指标，通过 单因素试验和响应面试验优化的方法筛选出酶解效果最好的两种酶，进行顺序酶解；所 得酶解液继续用乳酸菌进行发酵，优化发酵条件；在此基础上对羊骨自身的骨钙和多肽 - 在一定条件下进行螯合，无水乙醇沉淀获得胶原多肽 钙螯合物，并对其结构表征和相 关性质进行分析研究。结果如下： 1 （）筛选最优酶：三种酶 （木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶）水解提取羊骨中 55 40 45 4 h 4 h 5 h 可溶性钙的最佳工艺条件分别为：酶解温度 ℃、 ℃、 ℃；酶解时间 、 、 ； pH 6.0 2.5 7 5000 U/g 5300 U/g 1500 U/g 3 酶解 、 、 ；加酶量 、 、 。平行 次，得到的游离钙 含量分别达到 78.30 mg/ 100g 、1008.68 mg/ 100g 、45.68 mg/ 100g 。因此，最后选择木瓜 蛋白酶和胃蛋白酶进行后续试验。 2 pH （）最优两种蛋白酶的酶解组合为：在两种酶各自最优酶解温度、酶解 、加酶 量条件下，先木瓜蛋白酶酶解 3 h ，后胃蛋白酶继续酶解 3 h ，最终得到的游离钙含量最 高，可达到 1839.14 mg/ 100g 。 3 3% 6% 24.5h （）酶解液发酵的最佳工艺条件：葡萄糖添加量 、接种量 、发酵时间 、 发酵温度 37℃和初始 pH6.5，其游离钙含量达到 22 12.58 mg/ 100g 。 4 42.57 ± 0.09% - 15.81% ± 0.06% （）钙螯合能力为 ；肽 钙螯合物中钙含量为 。 5 （）紫外吸收光谱分析发现胶原多肽和钙螯合后形成螯合物；荧光光谱的变化表 明螯合反应可能是侧链残基和 Ca2+相互作用所引起的；傅立叶变换红外光谱推测胶原多 Ca2+ - 肽的主要结合位点为肽链上的羧基、羟基、氨基，这些基团与 协同形成肽 钙螯合 物；DSC 图谱上新吸收峰以及 X 衍射图谱中新衍射峰的出现都进一步证明了螯合反应 的发生；氨基酸分析表明通过氨基酸的残基羧基在反应过程中结合钙；SEM 也同样表 明在螯合过程中，由于肽和钙离子之间的相互作用而改变了肽的初始结构。 6 - - （）对肽 钙螯合物进行稳定性研究：肽 钙螯合物在不同温度环境下相对稳定；在 pH - 不同 环境下，相对于酸性环境，中性和碱性环境下肽 钙螯合物更稳定。 7 - + （）对肽 钙螯合物进行体外消化研究：用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胃