γ干扰素释放试验在结核感染临床诊断中应用.ppt

结核感染酶联免疫斑点试验 () 在结核感染诊断中的应用 王 强 年月 概 况 ? 目前，结核病仍然是全球严重的公共卫生问题之一。据 估计 , 全球有约 亿人感染结核分枝杆菌 , 每年有约万人死 于结核。 ? 我国是世界上个结核病高负担国家之一 , 结核感染导致的 死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的倍以上。 概 况 ? 结核病临床表现多样 , 可累积全身组织器官 , 肺外结核更加隐匿 , 临床明确诊断十分困难。 ? 既往辅助诊断：结核菌素皮试 ( , ) 、体液涂片镜检、分枝杆菌培 养、组织病理、结核抗体检测、结核检测等 ? 结核菌素皮试 () 长期以来作为辅助诊断结核感染的重要手段。 缺陷 ? 在易受结核感染的免疫力低下人群中 , 敏感性低 ; ? 结核菌素纯蛋白衍生物 () 是多种蛋白的混合物。其中，含 有非结核分枝杆菌及卡介苗 ( ) 的抗原成分 , 接种人群的 “假阳性”率高。 ? 皮试的操作和结果的判断，存在一定主观性 , 降低了检查的 准确性。 概 况 ? 结核分枝杆菌进入人体后，能够诱导机体产生特异性中央记忆细胞 ( ， ) 和效应型记忆细胞 ( ， ) 。在结核菌被清除前，此类细胞不会消 除。当这些细胞再次接触到结核菌蛋白质时，就会释放细胞因子， γ 干扰素是其中的一种。 ? 根据结核菌进入人体后的免疫应答结果 , 可以分为：无结核感染、 活动性结核、潜伏性结核和治愈四种状态。 ? 免疫力正常的感染者 , 获得性细胞及体液免疫，只能控制结核感染 结核杆菌特异性抗原 ? 的基因编码是结核分枝杆菌特有的基因 ? 在卡介苗菌株和绝大多数非结核分支杆菌中不存在 ? 按照基因编码产生的蛋白（ 和）具有高度特异性。 找到由此蛋白诱导产生的 γ 干扰素，就能准确判断 体内是否存在结核菌。 结核感染酶联免疫斑点试验 () ? 通过酶联技术使含有这种体征性细胞因子 ( γ 干扰素 ) 的细胞着色，形成可识别斑点，具有直观、快速诊断 结核感染的优点。 ? 是以酶联免疫技术检测结核感染的新方法。是目前 最敏感的抗原特异性细胞检测方法之一。 ? 是在单细胞水平检测 γ 干扰素的分泌情况。 结核感染酶联免疫斑点试验 () ? 年通过欧洲批准 ? 年通过加拿大批准 ? 年通过美国审批 结果临床应用及评价 ? 结果究竟有什么临床意义？ ? 阳性能否肯定结核诊断？ ? 哪些人需要进行筛查？ ? 和既往诊断方法比较，其优缺点是什么？ 试验方法 空白对照组 阳性 ( 植物血凝素 ) 对照组 抗原组 抗原组 实验结果解读 ? 实验误差的判断：空白组斑点＜个，并且阳性对照组＞ 个，视为实验有效。 ? 如果空白对照＞个，或阳性对照组＜个，均视为实验条 件不正常。该条件下得出的实验结果属于“不确定”。 实验室应该查找原因，重新检测。 实验结果判断有反应性 ? 任一抗原组出现斑点，称之为”有反应性“。有反应性判断与空白对 照斑点数量相关。符合以下条件之一的判断为”阳性“ ? . 当空白组斑点数小于时，任一实验孔斑点数减去空白对照后≥, 结果判为阳性； ? . 当空白对照孔内斑点数大于时 , 任一实验孔斑点数大于空白对照 的倍 , 结果判为阳性。 实验结果判断无反应性 ? 不符合“有反应性”条件，属于“无反 应”。即视为阴性。 实验结果判断假阴性 ? 当阳性对照组结果为“不确定” ( ＜个 ) ，且抗 原和孔均”无反应“时，试验结果判断为” 不确定“。 敏感性与特异性评价 ? 由于潜伏性结核感染的诊断无金标准 , 敏感性评价仅在培养或病 理阳性的活动性结核患者中进行。 ? 等对例受试者进行研究。其中，绝大多数是结核培养阳性、 阴性 的成年人。结果 综合敏感性。在免疫力低下的人群中 , 依然维持 较高的敏感性。 ? 等报道了例非洲儿童的随访结果 , 平均年龄 岁 , 约 阳性 , 多数合 并营养不良。对于确诊或高度怀疑结核的病例 , 阳性率 , 阳性率为 (<) 。提示：年龄、 感染状态和营养不良的严重程度对结果无影 响 , 但均能导致 敏感性下降。 敏感性与特异性评价 ? 等研究了例肺外结核患者， 结果提示：对于活动 性肺外结核 , 和的敏感性分别为和 (<) 。 ? 等的分析研究了名受试者 , 为无结核接触史的健康 成年人 , 其综合特异性为 敏感性与特异性评价 ? 国内研