上海交通大学遗传学上午7组果蝇杂交实验.ppt

果蝇杂交实验方案 组员：郑书钰 4 王艺辰 3 卢春晓 2 吴牡丹 1 一、实验目的 1 观察认识果蝇性状。 2 了解果蝇生活史。 3 掌握果蝇的饲养方法。 4 学习杂交实验原理与方法，探索果蝇若干性 状遗传规律。 5 验证基因伴性遗传的规律 6 验证基因连锁与交换规律并计算重组值 二、实验材料 黑腹果蝇 Drosophila melanogaster P ：白眼，小翅，卷刚毛（ Xw m sn Xw m sn ）三隐 性突变体雌果蝇 红眼，长翅，直刚毛（ X+ + + Y ) 野生 型雄果蝇 果蝇的生活史 果蝇属完全变态昆 虫，其完整的生活周期科 分为卵、幼虫、蛹和成虫 4 个明显时期，如右图。 25 ℃ 时成蝇一般在交 配 1~2 天后开始产卵，卵 长约 0.5mm ，白色椭圆形 ，前端背面有一对触丝使 卵能附在食物或瓶壁上。 果蝇的完全变态发育： 卵（ embryo ）、幼虫（ instar larva ）、蛹 （ pupa ）、成虫（ adult ） 果蝇的生活史 受精卵 24 小时内 便孵化成幼虫，幼虫经两 次蜕皮 ( 分别为一龄幼虫， 二龄幼虫）成为三龄幼虫 ，三龄幼虫体长可达 4- 5mm ，用肉眼观察可见其 一端稍尖，上有一黑色钩 状口器，幼虫生活约 4 天左 右开始结蛹并停止摄食， 爬到相对干燥的表面，逐 渐形成菱形的蛹。 果蝇的完全变态发育： 卵（ embryo ）、幼虫（ instar larva ）、蛹 （ pupa ）、成虫（ adult ） 果蝇的生活史 从蛹中羽化出 的果蝇 8~12 小时候即 可交配，交配后精子 可以在雌蝇的受精囊 中储存一段时间，然 后释放到输卵管中。 所以杂交试验中母本 必须使用未交配雌蝇 。 为什么选择黑腹果蝇？ 黑腹果蝇生活史短，繁殖力强，相对性状明 显且可遗传，易于培养，培养成本低，符合上 述遗传学实验研究要求。 同时因其染色体仅 4 对，基因组仅约 165Mb ，并且基因组超过 60% 的片段同人类疾病基因相 似。 果蝇性别及突变形状的鉴别 认识：红眼与白眼 (w) ，长翅与小翅 (m), 焦刚毛 (sn) 与直刚毛 , 雄性与雌性， 性梳和平衡棍。 野生型：红眼、长翅、直刚毛 突变型：白眼、小翅、焦刚毛 杂交管的观察与记录 将所需品系的雌蝇与雄蝇放在一起培养，如果需要观察 F1 代的性状， 7- 8 天后，需要倒掉亲本，避免 F1 代雌蝇与父本杂交，影响结果。 果蝇管标记（纸盖） 亲本管： P （ +/- ），组别： 1 （上午） - 组数， 2- （下午） - 组数，接种时 间； 杂交管： F1/F2 ，组别： 1 （上午） - 组数， 2- （下午） - 组数，接种或杂 交时间； 工具的使用 培养瓶：有培养基，纸盖与瓶口的密封， 毛笔：分突变型和野生型，勿混用 麻醉瓶：干燥、空的培养瓶，突变型和野生型勿混用，用棉塞 文具盒：中的工具保持完整 记录与标记 实验流程与步骤概述 野生型 突变型 雌 雌 雄 雄 X w m sn X w m sn X + + + Y X ＋＋＋ X ——— 白眼，小翅，卷刚毛 红眼，长翅，直刚毛 X w m sn Y 亲本 8 天后 子一代 野生型 野生型 突变型 突变型 弃 亲 本 野生型 突变型 继续培养 12h 后羽化 突变型 处女蝇 雌果蝇 每隔 12h 8 天后 雄果蝇 子一代 收集 30 对雌雄，转瓶 子二代羽化， 观察 弃亲本 ? 记录雌雄与眼色 8 天后 弃亲本 ? 记录 眼色，翅形，刚毛 ? 记录雌雄与眼色 小组组员分工 记录表格设计 伴性遗传 1 伴性遗传 2 亲代 10 只白眼，雌 X w X w 10 只 红眼，雄 X+Y f1 ____ 只 白眼，雄 Xw Y f1 ___ 只 红眼，雌 X+Xw 记录表格设计 连锁与交换 类别 基因型 表型 观察数 亲本型 X + + + X w m sn X w m sn Y 红眼，长翅，直刚毛 白眼，小翅，卷刚毛 单交换 1 单交换 2 双交换 合计 日期 第一天 第二天 第三天 第四天 第五天 第六天 .. 性状／只 性状／只 性状／只 性状／只 连续性状观察