免疫荧光型指南.ppt

免疫荧光分型指南 丁桃 加拿大公共卫生署 国家HV免疫实验室 昆明20073 OUREI  概要 样品处理 单克隆抗体 组 滴定 补偿 荧色物 绝对数校准荧光球 通用分析模板 OUREI  样品处理 溶解免洗的方法 单克隆50-100全血 溶解液 抗体 孵化10/15分钟 孵化10/15分钟 流式细胞仪分析 OUREI  建议 加入2%的多聚甲醛固定 绝对记数时荧光球和血液移液的准确性 加过荧光球的样品,必须在当天上机分析 在上机采集数据时,应在达到至少1微升血样之 后才能停止;即如果荧光球的浓度为每微升 1000,应收集到至少1000个荧光球才能停止采集 OUREI  一抗体组合 OUREI  不同的抗体组合 双色: Facscount and Guava: CD3/CD4 PLG: CD45/4 三色: BD and BC: CD4/3/45. CD4/8/3 四色: BD and BC: CD4/8/3/45 OUREI  应使用哪种抗体组合? CD4/CDS/CD3 CD16/CD19/CD3 CD45/CD4 CD45/CDS CD45/CD3/CD4 CD45/CD3/CD8 CD4  NIH AND CDC指南 Cytometry IClinical Cytometry Original Articles Use of CD45 Gating in Three and Four-Color Flow Cytometric Immunophenotyping: Guideline From The National Institute of Allergy and Infectious Diseases, Division of aids Carol T. Schnizlein-Bick, Francis F. Mandy, Maurice R.G. O'Gorman, Helene Paxton. Janet K-A. Nicholson, Lance E Hultin, Rebecca S Gelman Cynthia L wilkening, and Daniella Livnar VoL. 52/RR-2 Recommendations and Reports Guidelines for Performing Single-Platform Absolute CD4* T-Cell Determinations with CD45 Gating for Persons Infected with Human Immunodeficiency virus Francis F. Mandy, PhD Ja stk a nelson m OUREI  cD45的使用 CD45可标记所有的白细胞 CD45对淋巴细胞的表达大大高于单核细 胞和巨噬细胞,故用来识别淋巴细胞 OUREI  cD45异相门控:一个稳固的方法 样品年龄 cD45/ss异相门 FS/SS均相门 天 CD4 FIT( 4天 Schnizlein-Bick et al. 2001 OUREI