单向双向免琼脂扩散.ppt

实验 单向、双向免疫琼脂 扩散  沉淀反应 ·可溶性抗原(如细菌外毒素、血清蛋白等)与相应抗体特异性结合后,在一定条件 (适量电解质、适宜的pH值及温度)下,经过一定时间,在比例适宜处形成肉眼 可见的沉淀现象 可溶性抗原 相应抗体 沉淀线或沉淀环  沉淀反应 对流免疫电泳 环状沉淀反应 电 沉淀反应 双向扩徽泳 琼脂扩散试验 单向扩散 技术 絮状沉淀反应 火箭免疫电泳  实验原理 将适量的抗体均匀混入琼脂内制成琼脂板,打孔,在孔中加入一定量的待测抗原, 抗原向四周呈辐射状扩散,与抗体相遇,在比例合适时形成白色沉淀环 含有抗体的琼脂凝胶板 沉淀环  实验原理 ●此方法用已知的抗体测未知的抗原。由于抗体已与凝胶混合,不会再扩散,仅抗 原从小孔向四周扩散,因此称为单向琼脂扩散试验。 沉淀环直径的大小与抗原含量成正比,用标准抗原制成标准曲线,从标准曲线上 可以查出待检样品中抗原的含量  实验原理 6@@ 0.875 E0.75 0.5 标准品抗原浓度测定 0.125 1测定沉淀环直径 2在标准曲线上查找相应抗原浓度 沉淀不直径 绘制标准曲线 000 不同病人抗原浓度测定  实验方法 (一)标准曲线的制备 制作琼脂板所需要的1%盐水琼脂(4mL)。 首先分装其1/2量的2%盐水琼脂,溶化后置56℃水浴中平衡温度备用。  实验方法 ·稀释抗体:用pH72的PBS稀释标准兔抗牛⑩G血清抗体,使最终浓度为抗体效 价的倍,其分装量应与2%盐水琼脂量相等。 ·制备琼脂板:将已稀释的标准兔抗牛lgG血清抗体于56°℃水浴中预热半分钟,再 倾注于已溶化并维持56℃的2%盐水琼脂中混匀,取4m刻倾注于玻片上,待 凝固后即可。  实验方法 ·打孔:将琼脂板置于模板上,在同-直线上刖打孔器打孔5个,孔距10r ·用PBS缓冲液稀释不同浓度的标准参考蛋白。(牛兔疫球蛋白gG,应根据制品 说明进行稀释) 加样:将已稀释的不同浓度的标准参考蛋白依次用微量加样器每孔加入10ul (注意:每一稀释度均应更换塑料吸头)