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质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序 60 质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序 一、感受态细菌制备（  CaCl2 法） 1. 从 LB 平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落，  接种于 5ml 不加  Amp的  LB 培养基中， 37℃振荡培养过夜（ 200r/min ，至  OD=1.5 左右）。 2. 取 0.5ml 上述振荡过夜的菌液，转入含 50ml 的 LB 的三角烧瓶（ 1%） 中， 37℃条件下振荡培养 2~2.5 小时左右（ 200r/min ），使 OD600 达到 0.2~0.4 左右（ 100μ l 测 600nm时 OD值）。 将培养液 50ml 分装到 4 个 10ml 的离心管中，每管 10ml，冰上放置 10min， 4℃条件下， 4000r/min 离心 10 分钟，弃上清。将离心管倒扣在吸水纸上，尽量倒尽管中的培养基。 每管加入预冷的 0.1mol/l CaCl2 溶液 2ml，用枪轻轻吹打，重悬沉淀。转移到一个离心管中，共 8ml。 冰上放置 10min 后， 4℃条件下， 4000r/min 离心 10min。 7. 沉淀用预冷的 1.6ml 含有 15%甘油的 0.1mol/l 的 CaCl2 溶液悬浮。分 装成 200μl 的小份，共 8 管（ 40ml 变为 1.6ml 浓缩 25 倍），-70 ℃保存备