WB实验步骤详细总结.pdfVIP

蛋白提取 （所有操作在冰上进行） 1. 裂解 1) 配裂解液： PMSF=100 ： 1，（裂解液和 PMSF 在 -20 ℃保存，提前一天 4 ℃解冻） 取 2ml 裂解液，加 20 μl PMSF 混匀 2) 称取 30mg 组织，切碎放入标记好的 AP 管中，加入 600 μl 上述 1 中液体（加入液 体与组织比例为 20 ：1），冰上静置 10min 2. 匀浆 先用超纯水润洗一下匀浆机的钢头，（同时进行几组匀浆时，组间也要润洗钢头） 在匀浆机（在生化室）上每次匀浆 10s，两次（间隔 5s），冰上静置 30min 3. 离心 （在基础 4 楼 416 室） 1) 自带 1ml 枪以及蓝枪头和黄枪头，三个 1.5 的离心管（①，②两个标记，③加少量 超纯水，③号是为了离心平衡，对称放置） 2) 将离心机预冷至 4 ℃为止，以 1200×10r/min 离心 15min