样本前期处理理及HE染色赵恒.pptVIP

沈阳佰创生物技术有限公司 Baichuang 样本的前期处理及HE染色 制作人:赵恒 日期:2014-12-30  取材 注意事项 1、植物材料选择时须尽可能不损伤植物体或所需要的部分 动物材料取用时常对动物施以麻醉,常用的麻醉剂有氯 仿和乙醚,或将动物杀死后迅速取出所需要的组织 取材必须新鲜,这一点对于从事细胞生物学研究尤为重 要,应该尽可能割取生活着的组织块,并投入固定液 3、切取材料时刀要锐利,避免因挤压细胞使其受到损伤 切取的材料应该小而薄,便于固定剂迅速渗入内部。 般厚度不超过2mm,大小不超过5×5mm2 Baichuang  固定 固定液的性质和条件 1、能迅速渗入组织,使组织细胞形态在短期内不至于有 较大变化 2、固定液有相当的渗透力,对组织各部分的渗透力相等 ,可使组织内外完全固定 3、使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变 尽可能避免固定剂使组织膨胀或收缩 5、使组织达到一定硬度,获得较佳的折光率和对染料具 有较强的亲合力 Baichuang  脱水透明 标本经二甲苯透明后,折射率改变,透明度提高,使得染 上色的部位更清晰地显示出来 步骤 流水冲洗4→丌0%乙醇2→80%乙醇过夜→90%乙醇 2h→无水乙醇Iih→无水乙醇Ih→二甲苯I15min→ 甲苯Ⅱ15min Baichuang  较常用的透明剂是二甲苯、甲苯、苯、氯仿等 1、二甲苯作用较快,透明力强,但组织块在其中停留过久, 容易收缩变脆变硬 2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同,唯沸点较低, 透明较慢,但不会使组织变脆 3、苯的用法同于二甲苯,对组织的收缩作用小,但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。 4、氯仿适于大块组织的透明 Baichuang  注意事项 1、透明时间应由组织大小而定,一般各级停留时间在5min 至15min,在纯二甲苯中应更换2次,总时间则以不超过 1h为宜 2、材料经过透明,会显示出前一步脱水的效果如何,若脱 水彻底,组织则显现透明状态,如组织中有白色云雾状 说明脱水不净,须返工处理,但返工的效果往往不好 使用二甲苯透明时,应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态 Baichuang  浸蜡包埋 1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h,然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行,恒温箱的温度调节至高于石 蜡熔点3度 Baichuang