一代测序与二代测序的区别与联系.pdf

一代测序与二代测序的区别与联系 Sanger 法测序（一代测序） Sanger 法测序利用一种 DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。 直到掺入一种链 终止核苷酸为止。 每一次序列测定由一套四个单独的反应构成， 每个反应含有所有四种脱氧 核苷酸三磷酸 (dNTP) ， 并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP) 。由于 ddNTP 缺 乏延伸所需要的 3-OH 基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在 G 、A、T 或 C 处终止。 终止 点由反应中相应的双脱氧而定。每一种 dNTPs 和 ddNTPs 的相对浓度可以调整，使反应得 到一组长几百至几千碱基的链终止产物。 它们具有共同的起始点， 但终止在不同的的核苷酸 上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用 X- 光胶片放射自 显影或非同位素标记进行检测。 高通量测序（二代测序） 高通量测序技术（ High-throughput sequencing ， HTS）是对传统 Sanger 测序（称为一代 测序技术）革命性的改变 , 一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定 , 因此在有些文 献中称其为下一代测序技术 (next generation sequencing ，NGS) 足见其划时代的改变 , 同 时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能 , 所以又被 称为深度测序 (Deep sequencing) 。 第一代和第二代测序技术 大约 第 读长 平台 测序方 检测 X 公司 ( 碱 优点 相对局限性 名称 法 方法 代 基 数) ABI/ 3130 桑格 - 高读长，准确度一 通量低；样品制备 第 荧光 生命 xL-3 毛细管 600- 次性达标率高， 能 成本高，使之难以 一 / 光 技术 730x 电泳测 1000 很好处理重复序 做大量的平行测 代 学 公司 L 序法 列和多聚序列 序 第 GeXP 桑格 - 高读长，准确度一 通量低；单个样品 贝克 荧光/ 600- 一 遗传 毛细管 次性达标率高， 能 的制备成本相对 曼 光学 1000 代 分析 电泳测 很好处理重复序 较高 系统 序法 列和多聚序列； 易 小型