《免疫学检验技术》 2.化学发光免疫技术概述 21.1 化学发光免疫技术概述.pptxVIP

第二十一章化学发光免疫技术 教学目标知识目标1.掌握：化学发光、化学发光剂的概念及常用的化学发光剂；直接化学发光免疫分析的基本原理（重难点）；酶促化学发光的原理及关键技术；化学发光免疫技术的临床应用（重点）。2.熟悉：电化学发光免疫分析的基本原理（重难点）、三类化学发光免疫分析的方法学评价。3.了解：发光的概念及分类、化学发光物的制备。技能目标掌握化学发光免疫技术的操作流程思政-素质目标质量控制、生物安全意识、临床免疫学思维本章要点1.化学发光剂的概念及常用的化学发光剂。2.化学发光免疫分析的基本原理及其技术类型。3.化学发光酶免疫分析基本原理及其分离技术。4.电化学发光免疫分析基本原理。5.化学发光免疫技术的临床应用。目　录 化学发光免疫技术概述一化学发光免疫技术的临床应用化学发光免疫分析二四五三化学发光酶免疫分析电化学发光免疫分析前 言 化学发光免疫技术是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的抗原抗体反应技术相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、维生素和药物等的检测分析技术。该技术具有特异性高、灵敏度高、分离简便、 快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化分析等特点，在免疫学检验中应用广泛。 标记免疫技术化学发光免疫技术放射免疫技术酶免疫技术荧光免疫技术金免疫技术化学发光免疫分析技术的类型类别标记物底物最终检测信号均相/非均相反应直接化学发光免疫分析吖啶酯（AE）无光强度非均相反应化学发光酶免疫分析HRPALP鲁米诺及其衍生物AMPPD光强度光强度非均相反应非均相反应电化学发光免疫分析三联吡啶钌无光强度非均相反应鲁米诺氧途径免疫分析激发基团+发光基团无光强度均相反应化学发光与酶免的对比酶 标化学发光测量精度定性/半定量测量定量测量人体伤害底物可有致癌性无有效期较长长干扰因素较多极少测试项目少多化学发光与放免的对比放 免化学发光测量精度较高高人体伤害放射性无有效期较长长干扰因素较多极少测试项目较多多第一节 概述 一、发光 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由低能级的基态跃迁到高能级的激发态，然后再返回到基态，释放出的能量表现为光的发射。根据形成激发态的激发能不同可将发光分为光照发光、生物发光和化学发光。1.光照发光（photoluminescence）发光剂（荧光素）经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。2.生物发光（bioluminescence）发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP产能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。3.化学发光某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。 吸收化学能基态（低能级、稳定） 激发态（高能级、不稳定）光能一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件：①该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光②要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态③激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子 二.化学发光剂在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光底物。作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下几个条件： 发光的量子产率高 物理-化学特性要与被标记或测定的物质相匹配 能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物 其化学发光常是氧化反应的结果 在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性 常用的化学发光剂或发光底物有 1.直接化学发光剂 2.酶促反应的发光底物 3.电化学发光剂 1.直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。如常用的吖啶酯（acridinium，AE） 。 吖啶酯在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 2.酶促反应的发光底物 是利用标记酶的催化作用，使发光剂（底物）发光。 目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）。HRP的常用 的发光底物为鲁米诺或其衍生物，ALP的发光底物 为金刚烷（AMPPD）（1）鲁米诺或其衍生物 鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为425nm的光。 鲁米诺增强发光反应原理（2）AMPPD 〔3-(2‘-螺旋金刚烷)