《免疫学检验技术》 3.酶联免疫吸附试验 16.3 酶联免疫吸附试验.pptxVIP

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2020-10-02 发布于北京
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《免疫学检验技术》 3.酶联免疫吸附试验 16.3 酶联免疫吸附试验.pptx

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第十六章酶免疫技术 ;;;目　录 ; ELISA属于免疫标记技术的一种，1971年由荷兰和瑞典的学者提出，由于其操作过程简单易行并可以定量，从而使其在生物医学领域中得到了广泛的应用。; ELISA 方法操作简单，测定模式多，应用方便，亦可自动化，但测定线性范围较窄，批间变异相对较大，手工操作受影响因素较多，国内多用在抗原和抗体的定性检测，但也可用于定量检测。 ; 酶联免疫吸附试验测定法和其他免疫方法一样，都是以抗体和抗原的特异性结合为基础，其差别在于酶联免疫方法??酶或者辅酶作为标记物来标记抗原或抗体，用酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应。其最大的特点是利用聚苯乙烯微量反应板（或球）吸附抗原或者抗体使之固相化，在其中进行免疫反应和酶促反应。 ;一、ELISA的检测原理 ;待测样品（含待测物）与酶标抗原或抗体反应;二、ELISA的方法类型;; 如果血清标本中含有类风湿因子（RF），则可出现假阳性反应。因为类风湿因子是一种抗变性IgG的自身抗体，它可同时与固相抗体和酶标抗体的Fc段发生结合，导致假阳性的出现。 ;（二）双位点一步法;;（三）间接法; ;（四）竞争法;酶标抗原; 2.竞争法检测抗体;;（2）竞争法检测HBeAb：先将HBeAb包被在固相载体上，形成固相抗体，同时加入待测样本和中和抗原HBeAg，待测样本的抗体将与固相抗体竞争与中和抗原HBeAg结合。加入酶标的特异抗体，再加入酶底物，则显色的强弱与待测样本中的相应抗体的含量成反比。 ;; (五) 捕获法;; 在应用此法时需注意RF(IgM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(IgM类)既能与固相载体上的IgM第二抗体结合，又能与随后加入的酶标抗体结合，从而导致假阳性结果。;;;三、ELISA的关键技术;（二）最适工作浓度的选择;（三）测定方法的标准化 ;四、评价与应用;（二）应用