配子和胚胎冷冻保存胚胎移植性别控制.pptVIP

第五部分胚胎生物技术 四、配子与胚胎冷冻保存 五、胚胎移植 六、性别控制  配子与胚胎冷冻保存 概念:配子与胚胎冷冻是指采用抗冻保护剂 对配子或胚胎进行脱水处理,再经过降温程序使 胚胎最终在-196℃条件下停止代谢活动,条件适 宜时解冻并使其恢复活力的技术。 意义:建立配子库、胚胎库;保护生物多样 性和珍惜濒危动物遗传资源;遗传资源及动物模 型的国际范围内运输;避免运输过程中携带细菌 或病毒。  原理: 细胞代谢活动与温度 脱水过程 抗冻保护剂 冰晶与抗冻保护剂毒性/渗透压打击之间的平衡  细胞代謝活动与温度 配子及胚胎的自身活力和代谢活动直接受温度变化的影 响,当处于超低温(-196摄氏度)时,代谢活动完全停止, 处于静止状态,当在适宜条件下温度升高后又可以恢复活性。 脱水过程 配子或胚胎冷冻保存事实上是一个脱水过程,当配子或 胚胎处于高渗溶液中,细胞内的水分通过细胞膜外流,当环 境渗透压足够大或胚胎暴露时间足够长时,细胞内的水分充 分外流,从而在冷冻过程中避免或减少冰晶的形成  抗冻保护剂: 通常在冷冻液中添加抗冻保护剂形成高渗,细胞内 水分外流的同时,抗冻保护剂内流至配子或胚胎细胞内 抗冻剂存在使溶液的冰点降低,使胚胎有更多的时间把细 胞内的水分脱出,避免形成冰晶。但抗冻剂具有毒性,尤 其在高浓度和高温情况下毒性更大。 冰晶与抗冻保护剂毒性/渗透压打击之间的平衡 冷冻过程中除了冰晶、抗冻剂毒性外,还要考虑渗 透压打击。因此冷冻成功与否就在于在冰晶和抗冻剂毒性 和渗透压打击之间的平衡点。抗冻保护剂浓度越高、处理 时间越长脱水越彻底,但毒性和渗透压打击越大。  抗冻保护剂的种类 1、小分子渗透性抗冻保护剂 甘油、乙二醇、丙二醇、DMSO等 2、大分子非渗透性抗冻保护剂 蔗糖、聚蔗糖、棉子糖,麦芽糖,海藻糖等 3、卵黄( spern)  冷冻保存及解冻方法 精液 二、卵子或胚胎  、精液冷冻 小分子渗透冷冻保护剂(甘油)+卵黄,液氮蒸气熏 蒸或干冰冷冻 颗粒冻精 细管冻精  精液冷冻步骤: ◆采精 ◆精液品质检查 ◆精液的稀释 ◆精液保存  (一)、采精: 定义:借助特定的器械将雄性的精液采集出来的技术。 (一)假阴道法 Artificial vagina(牛、羊) (二)手握法和筒握法 a gloved hand(猪) (三)按摩法采精 Massage method(犬、鸡) (四)电刺激采精法 Electroejaculation(野生动物和丧失交配能力 但种用价值高的公畜) Funnel