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经典专科、本科、硕博、研究生、期刊毕业论文 仅供参考 精心整理 仅供参考 勿用作商业用途 西南林业大学 本科毕业（设计）论文 （2018届） 题目：硬叶兜兰居群水平的ITS基因扩增与信息分析 教学院系 园林学院 专 业 园艺14 学生姓名 张如礼 指导教师 李宗艳（副教授） 评 阅 人 2018年4月3日 硬叶兜兰居群水平的ITS基因扩增与信息分析 张如礼 （西南林业大学园林学院，昆明650224） 摘要 为优化兜兰ITS-PCR反应体系，以硬叶兜兰为试材，用改良的2×CTAB提取总的DNA，以10×PCR buffer1ul、Mg2+1.25ul、dNTP1.2ul、引物0.25ul、Taq酶0.3ul、ddH2O3.45ul为基础，模板DNA为2ul (50ng/ul)，通过实验摸索PCR的最佳退火温度，优化反应体系，对硬叶兜兰进行核基因ITS间隔子扩增，通过0.8％琼脂糖凝胶电泳在Bio-Rad凝胶成像系统筛选可行反应产物。反应产物经测序分析，目的基因片段大小在793-809bp , 通过NBCI网上在线对比分析证实为硬叶兜兰的ITS基因，该基因与同属植物的同源性为90%-99%。 关键词：硬叶兜兰；ITS间隔子扩增；反应体系 精心整理 仅供参考 勿用作商业用途 经典专科、本科、硕博、研究生、期刊毕业论文 仅供参考 精心整理 仅供参考 勿用作商业用途 目录 经典专科、本科、硕博、研究生、期刊毕业论文 仅供参考 精心整理 仅供参考 勿用作商业用途 1 前言 2 1.1 兜兰属植物的概况 2 1.2 兜兰属植物研究进展 4 1.2.1 兜兰属植物的繁殖方法 4 1.2.2 ITS技术在兰科植物中的运用 6 1.3 研究的目的及意义 7 2材料与方法 9 2.1 材料收集与处理 9 2.2 DNA的提取 9 2.3 ITS-PCR反应体系的建立及确定引物退火温度 10 2.3.1 ITS-PCR反应体系的建立 10 2.3.2确定引物退火温度 11 2.4 产物的检测与数据分析 11 2.5 试剂与仪器 11 3 结果与分析 12 3.1 DNA质量检测结果 12 3.2 ITS-PCR反应体系 13 3.3退火温度的确定 13 3.4 目的基因生物学信息 13 3.5 四个居群DNA序列变异情况 16 结论与讨论 21 参考文献 22 指导老师简介 24 致谢 25 精心整理 仅供参考 勿用作商业用途 1 前言 1.1 兜兰属植物的概况 兜兰,也称“女士拖鞋兰”、“仙履兰”,是兰科（Orchidaceae）兜兰属(Paphiopedilum)植物的统称。在拉丁语中，兜兰属名Paphiopedilum由爱神Paphos和鞋Pedilon组成。世界上大约有66种兜兰属植物。近年来，已发现10多个新物种，总数超过80种[1]。兜兰属于亚热带植物，主要分布于东南亚至喜马拉雅低地至中国西南部，仅有少数物种分布在新几内亚和所罗门群岛。中国是兜兰属植物的主产区之一，有18种，主要生长在西南各省和地区，华南地区分布很少[2]。大多数种类的分布范围很窄，并具有一定的区域特征。例如杏黄兜兰（Paphiopedilum armeniacum）、硬叶兜兰（P. micranthum）、麻栗坡兜兰（P. malipoense）仅分布在热带过渡区的石灰岩山地中，而紫色兜兰具有更广泛的分布区域。陈心启等人认为，已知品种的最原始的代表品种可能是麻栗坡兜兰，是一个从杓兰属向兜兰属演化的中间类型或过渡类型。在我国各省的分布情况：（1）云南有14种，占全国的77.8％，占世界的21.5％。其中：紫纹兜兰（P. purpuratum）、同色兜兰（P. concolor）、带叶兜兰（P. hirsutissimum）在云南全境都有分布； 享利兜兰（P. henryanum）、巨瓣兜兰（P. bellatulum）、紫毛兜兰（P. villosum）主要分布于云南的东南部；飘带兜兰（P. parishii）、长瓣兜兰（P. dianthum）、硬叶兜兰（P. micranthum）主要分布在云南南部； 杏黄兜兰（P. armeniacum）和虎斑兜兰（P. markianum）主要分布于云南的西部；彩云兜兰（P. wardii）、波瓣兜兰（P. insigne）则分别分布于云南的西南部和西北部（2）贵州有7种，占全国的38．9％，主要有小叶兜兰（P. barbig