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- 2020-10-07 发布于天津
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大蒜细胞酶的提取分离与活性测定目的掌握酶的提取分离检测一般步骤了解酶在提取过程中的两个参数回收率纯化倍数试剂大蒜磷酸缓冲液氯仿乙醇混合液冷丙酮邻苯三酚浓盐酸方法提取称取大蒜蒜瓣加入石英砂研磨破碎细胞加入的磷酸缓冲液研磨搅拌分钟使充分溶解离心弃去沉淀得上清液留出备用准确量取剩余上清液体积记录除杂蛋白提取液加入体积的氯仿乙醇混合液搅拌分钟离心去沉淀得粗酶液取粗酶液备用精确测量剩余粗酶液体积酶的沉淀分离剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮搅拌离心得到沉淀将沉淀先加磷酸缓冲液溶解后在加混匀离心取上清得到酶液
大蒜细胞SOD酶的提取分离与活性测定
目的
1 ?掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。
2.了解酶在提取过程中的两个参数:回收率、纯化倍数。
试剂
大蒜, 磷酸缓冲液( , l) , 氯仿—乙醇混合液
冷丙酮, 邻苯三酚, 浓盐酸
方法
SOD提取:称取5g大蒜蒜瓣,加入石英砂研磨破碎细胞,加入、L的磷酸缓冲 液,研磨搅拌20分钟,使SOD充分溶解,6000rpm离心,弃去沉淀,得上清液。
(留出 1ml 备用, 准确量取剩余上清液体积 , 记录)
除杂蛋白 :提取液加入 1/4 体积的氯仿-乙醇混合液搅拌 10 分钟, 6000rpm
离心15min去沉淀,得粗酶液。(取1ml粗酶液备
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