土壤脲酶活性测定(改良靛酚蓝比色法).docVIP

土壤脲酶的测定方法（改良靛酚蓝比色法） 一、原理 以尿素为底物，经培养后根据脲酶酶促产物--氨（忽略硝化过程造成的氨氮损失）在碱性介质中与苯酚、次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚。该生成物数量与氨浓度成正比。后即称为靛酚蓝比色法，其结果精确性较高，重现性较好，在脲酶活性测定中的应用最为广泛。 二、试剂 1）甲苯 1ml/ps 注：甲苯易挥发，要在通风条件好的地方操作。 2）5%尿素：称取5g尿素，用水溶至100ml。 10ml/ps 3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。 20ml/ps 注：柠檬酸和氢氧化钾混合时大量放热，需小心缓慢混合，冷却后定容。 4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。 4ml/ps 注：实际配比为：125g苯酚+4ml甲醇+37ml丙酮+25ml乙醇，混合溶解为A液。54g氢氧化钠溶解为B液，冷却后备用。A+B,定容至1000ml即得苯酚钠溶液。 苯酚有毒，常温下凝固，不宜称取，需小心。 5）次氯酸钠