【课件-医学实验动物学】_遗传工程动物及其应用.pptVIP

遗传工程动物及其应用 遗传工程动物明星 多利——世界上第一只用已经分化的成熟的体细胞(乳腺细胞)克隆出的羊 遗传工程动物明星 乙肝小鼠——持续表达乙肝病毒表面抗原的转基因小鼠。 将乙型肝炎病毒基因注入小鼠受精卵，整合进基因组，让乙型肝炎病毒在小鼠体内生存，并代代相传 乙型肝炎的病因 发病机理及防治 药物筛选 疫苗验证 遗传工程动物明星 荧光鼠——取小鼠早期囊胚，注射转染了绿色荧光蛋白基因的小鼠胚胎干细胞后植入代孕母鼠子宫内 制作遗传工程动物目的 探索基因功能——发现基因 改造动物——产生新的生物学功能、特性，或者丧失原有功能 遗传学机理研究——对遗传本质的研究 内容提要 遗传工程动物制作的基本原理和技术 遗传工程动物的种类和应用 遗传工程技术 对 遗传物质（DNA）的体外施工 主要建立在基因水平上，因此也被称为基因工程/重组DNA技术 相比于传统保种、育种技术的优势： 1、高度预见性 2、精确 3、高效率 4、打破自然界限制（时空、种属） 基因工程动物 原理：分子遗传学 技术手段：分子生物学、微生物学 基本过程：体外构建杂交DNA(重组），导入活细胞，发育为个体 结果：改变原有遗传性状，获得新品种/物种 意义：使基因操作走向整体动物水平——从分子水平改造动物/改变动物基因组，从整体水平（活体动物）观察效应 基因工程动物 基因工程动物：通过基因工程技术/重组DNA，人为改变遗传性状的动物 转基因动物：以实验方法将特定外源基因导入动物受精卵或胚胎，使之稳定整合于染色体基因组，并能够遗传给后代的一类动物（有别于嵌合体动物） 1、其所有细胞均整合有外源基因 2、其外源基因能够遗传给子代 嵌合体 嵌合体在希腊神话中是指具有狮头、羊身和蛇尾的一种怪物。种内嵌合体　　1965年 获得了小鼠的嵌合体后代　　1968年 获得了绵羊的嵌合体后代　　1974年 获得了大鼠、家兔的嵌合体后代　　1984年 获得了牛的嵌合体后代　　1987年 获得了猪的嵌合体后代种间嵌合体　　1973年 小鼠与大鼠　　1980年 家养小鼠与野生小鼠　　1983年 牛与水牛　　1984年 绵羊与山羊 嵌合体 哺乳动物嵌合体的生产方法　　1．卵裂球聚合法　　将不同遗传性能而发育阶段相同或相近的胚胎卵裂球聚合在一起获得嵌合体的方法，胚胎发育阶段在8细胞至桑椹胚阶段较为理想。 2．囊胚注射法　　把一种或多种胚胎的卵裂球、内细胞团细胞或EC细胞、ES细胞直接注射到另一枚囊胚的腔隙中获得嵌合体的方法。 　　 嵌合体 嵌合体的生产效率低，种间嵌合体仅在少数动物上取得成功，远缘动物嵌合体仍存在很大障碍。 通过嵌合方式可能会得到经济价值或观赏价值更高的动物。 种间嵌合体技术也为拯救濒危动物提供一种方法。 特异性嵌合体技术若能使嵌入的细胞定向分化为嵌合体的某一组织或某一器官，有极高的医学价值（人心猪，真人耳鼠）。 转基因技术 广义：对动物基因组的所有改动 狭义：以显微注射、反转录病毒介导、胚胎干细胞介导等方式转入基因，获得新功能——转基因动物 基因转移/基因打靶：以精确的基因替换技术获得新基因，knock-in knock-out 转基因技术 转基因（狭义）原理和局限 1、细胞学原理：利用MII期卵母细胞无核膜、外源基因易导入特点 2、胚胎学原理：利用雌雄原核融合之前雄原核易见特点 3、分子生物学原理：随机整合 整合位点、表达效果的不可预期性 转基因技术 常用转基因技术手段 1、显微注射 将外源基因直接注射到受精卵原核内，迄今应用较为普遍和富有成就 对DNA片段大小无限制 无需载体，可获无载体片段的转入目的基因 操作简单，周期短 各种随机整合结果：位点、多拷贝 可能不整合/游离体 转基因技术 2、电脉冲法 利用高压电短脉冲破坏细胞膜电位，造成细胞膜可逆性穿孔，以便外源DNA进入细胞 瞬时转染/游离体、稳定转染/整合 DNA用量大、细胞容易死亡 转基因技术 3、逆转录病毒法 利用逆转录病毒侵入宿主细胞并整合于DNA的能力，适合难以观察到雄原核的禽类受精卵 整合率较高 单拷贝单位点 可能得到嵌合体、逆转录病毒的潜在危害、可携带DNA长度有限 转基因技术 4、精子载体法 利用受精作用 避免人工方法导致原核损伤 实践中成功率较低 胚胎干细胞介导 胚胎干细胞：高度未分化细胞，可被诱导分化为几乎所有机体细胞类型；哺乳动物囊胚期内的细胞团分离出的尚未分化的胚胎细胞（囊胚期内层细胞），具有发育为各种成体器官细胞的多能性，但不能发育为胎盘，因此不具有发育为完整个体的全能性 将整合外源基因的ES细胞注入受体囊胚腔中发育为嵌合体，或培育筛选无损囊胚植入代孕母体子宫发育为转基因动物 对ES细胞的操作和培养容易，但ES细胞系难建立