玉米BES1_BZR1转录因子基因鉴定.pdf

 摘要 油菜素内酯（Brassinosteroid, BR ）作为植物特有的固醇类激素，在生长发育和应 激反应过程中起重要作用。BES1 （BRI1-ethylmethylsulfone-suppressor 1 ）和 BZR1 （Brassinazole-resistant 1）是BR 信号通路中的关键转录因子，通过调控BR 响应基 因的表达，进而调控植物的生长发育及逆境应答。玉米基因组庞大，存在大量重复序 列，这可能导致ZmBES1/BZR1 基因家族成员在进化和功能上具有多样性。本研究通 过生物信息学分析，在玉米基因组中鉴定了ZmBES1/BZR1 家族全部成员，并对各成 员的基因结构、亲缘关系、染色体定位、顺式作用调控元件和表达模式进行分析。随 后，运用实时荧光定量PCR 技术检测了ZmBES1/BZR1 基因在脱落酸（Abscisic acid, ABA ）和不同光质处理下的表达差异。最后，对各成员的编码序列进行PCR 克隆后， 鉴定其亚细胞定位。本研究为解析玉米 ZmBES1/BZR1 的功能及可能参与的信号转导 途径提供参考。主要结果如下： （1）通过全基因组分析鉴定到11 个ZmBES1/BZR1 基因家族成员，他们不均匀 分布在玉米10 条染色体中的7 条染色体上，其中有3 对基因是旁系同源基因。各成 员含有不同数量的内含子，包括phase-0、-1、-2 三种内含子，其中phase-0 出现频率 最高（84.8%），说明基因结构多样性较低。 （2 ）ZmBES1/BZR1 蛋白N 端均有一个BES1/BZR1 特异且高度保守的碱性螺旋 -环螺旋（basic helix loop helix, bHLH ）结构域，其中ZmBES1/BZR1-4 和-5 除包含 bHLH 结构域，C 端有一个BAM 结构域。根据氨基酸序列的相似程度及进化分析结 果，玉米ZmBES1/BZR1 家族分为2 个亚类，ZmBES1/BZR1-4 和-5 同在一个亚类， 其余9 个ZmBES1/BZR1 分到同一亚类。 （3 ）对ZmBES1/BZR1 基因启动子序列分析表明，ZmBES1/BZR1 各成员启动子 区存在大量的光响应和胁迫响应元件。同时，对已公布的玉米转录组数据分析发现， ZmBES1/BZR1 基因在不同组织的不同发育阶段呈现不同的表达模式，其中 ZmBES1/BZR1-1 在各组织器官中持续高表达，ZmBES1/BZR1-5、- 7 和-10 在多数组织 器官中表达较高，ZmBES1/BZR1-2 、-3、-4 和-9 仅在少数组织器官和发育阶段表达。 说明ZmBES1/BZR1 基因成员的表达可能受生长发育和环境因素的调节，在不同生长 发育阶段起不同作用。 I （4 ）实时定量PCR （Quantitative real-time PCR ，qRT-PCR ）结果显示，在ABA 诱导下，ZmBES1/BZR1-1、-4 和-5 在叶片中的表达显著上调，ZmBES1/BZR1- 7、-8、 -10 和-11 在叶片中的表达显著下调。然而，ZmBES1/BZR1-4 和-5 在根中的表达显著 下调，ZmBES1/BZR1-1、-3 、-10 和-11 在根中的表达显著上调。在暗处理下，除 ZmBES1/BZR1-9 和-10 表达无显著变化，其余成员在叶片和根中的表达均显著上调。 红光处理下，ZmBES1/BZR1-1 、-4 和- 7 在叶片和根中的表达均显著上调， ZmBES1/BZR1-3 和-11 在根中的表达显著上调。然而，ZmBES1/BZR1-2 、-5、-8 在叶 片和根中的的表达均显著下调，ZmBES1/BZR1-3 和-11 在叶片中的表达显著下调。远 红光处理下，除ZmBES1/BZR1-9 和-10 表达无显著变化，其余成员在叶片和根中的表 达均显著上调。此外，在所有样品中均未检测到ZmBES1/BZR1-6 的表达。 （5 ） PCR 克隆结果显示，除ZmBES1/BZR1-6 外，其余成员均被成功扩增到。 分别构建各成员开放阅读框 （Open reading frame, ORF ）融合eGFP 标签的植物表达 载体35S-ZmBES1/BZR1-eGFP ，转化洋葱表皮和玉米原生质体进行瞬时表达。结果表 明