免疫球蛋白的提取方法.docxVIP

免疫球蛋白的提取方法 根据猪血中含有的各种蛋白质的分子大小、 电荷多少、 溶解度以 及免疫学特征等 , 从血液中提取免疫球蛋白 , 常用的有盐析法、 有机溶 剂沉淀法、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法等。 免疫球蛋白的提取盐析法 盐析法是分离蛋白质的重要方法之一 , 是利用抗体与杂质之间对盐浓度敏感程度的差异性进行的。 选择一定 浓度范围的盐溶液使部分杂质呈 “盐析”状态, 抗体成分呈“盐溶” 溶 解状态。离心去除盐析沉淀状态的杂蛋白 , 得到的上清液再选择一定 浓度范围的盐溶液使抗体成分呈盐析状态 , 离心得到的沉淀物即为纯 化的目标抗体。 目前常用的盐析法有饱和硫酸铵分步盐析法、 辛酸沉 淀法、氯化铁沉淀法、多聚磷酸盐盐析法等。饱和硫酸铵分步盐析硫 酸铵是盐析法最常用的无机盐 , 主要原因是它溶解度大 , 随温度变化 小, 对蛋白质有保护作用 , 高浓度时可抑制微生物和蛋白酶的活性 , 价 格也不贵。 免疫球蛋白的饱和硫酸铵分步盐析法操作简单 , 对设备和操作条 件要求不高 , 便于工业化生产。其具体步骤为 : 取一定量血浆 , 加生理 盐水稀释 , 边搅拌边 缓慢加入饱和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度 20%4C静置1h,4000r/min 离心10min,弃沉淀，上清液中继续加入饱 和硫酸铵溶液至硫酸铵终浓度 50%,浓氨水调pH值至7.0,4 C静置 2h,4000r/min离心2