无菌实验室的管理要求.pdfVIP

. 无菌实验室的管理要求 食品微生物实验室的无菌间应制定质量管理标准， 并设专人负责无菌间的定期 环境监测工作。对无菌室的管理可遵循以下的原则： 1. 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持 在20-24 ℃，湿度保持在45-60% 。超净台洁净度应达到100级。 2. 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服， 鞋，帽子，口罩和手套(或用70% 的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 3. 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行 吹风。操作人员进入无菌室应关掉紫外灯； 4. 人员进入无菌室要穿无菌衣、帽、口罩和专用鞋，非工作人员不得随意进入； 5. 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1 ％的新洁尔灭溶 液等。 6. 无菌室内配备紫外灯进行空气消毒，应定期用适宜的消毒液 （70%酒精或0.2%新洁尔灭） 灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 7. 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。每日进行湿式小扫除，每周进行大扫除， 每月进行空气和实验台表面的细菌学检测，各项指标控制在最低标准，符合无菌室的技 术要求。 8. 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 9. 需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应用适宜的方 法灭菌。 10. 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉 消毒外表面。 11. 无菌间内应保持清洁。操作完毕，应及时清理无菌室，用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭 . . 工作台面，不得存放与实验无关的物品。再用紫外灯辐照灭菌。需30W紫外灯，距离在 1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免 引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线 穿透的影响。 12. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小 窗传递。 13. 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若 干，无菌操作分别注入融化并冷却至约 45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒 置于30～36℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左 中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～36℃培养箱培养48小时，取出检查。100级 洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超 过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 无菌操作基本技术及要求 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow) 以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70% 的酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。 2. 每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细 胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%的酒精擦拭无菌操作抬面。操 作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 3. . 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒 等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%的 酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘的非无 菌区域操作。 4. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在 . . 打开之容