动物微生物与免疫技术 动物微生物与免疫技术、任务六 猪相关传染病的抗体的测定 技能点10间接血凝试验.pptVIP

技能点10 间接血凝试验 技能点10 间接血凝试验 主要内容 一、目的要求 二、仪器及材料 三、方法与步骤 一、目的要求 初步学会间接血凝的操作及结果判定。 二、仪器材料 96孔110°～120°V型医用血凝板、10～100μl可调微量移液器、加样头、微型振荡器、猪瘟间接血凝抗原（猪瘟正向血凝诊断液）、猪瘟标准阳性血清和阴性血清、被检血清（56℃水浴灭活30min）、2%兔血清PBS液（取pH7.6、0.01mol/LPBS98ml，灭能兔血清2ml，于4℃冰箱保存即成2%NRS液）。 三、方法与步骤（以猪瘟的间接血凝为例） 1.按表1进行操作。 表1猪瘟间接血凝操作术式 V型板孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 血清稀释倍数 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 对照 2%NRS (μl ) 待检血清 (μl ) 抗原 (μl ) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃去50 25 25 25 25 25 25 25 25 振荡1min 室温下（15℃以上）静置1.5～2h。 三、方法与步骤 2．阴性和阳性对照 在血凝板上的第12排孔加2 %NRS60μl，取阴性血清20μl加入后混匀，取出30μl弃去，然后加入抗原25μl，为阴性血清对照孔。 三、方法与步骤 2．阴性和阳性对照 在血凝板的第12排第1孔加2%NRS70μl，第2至第7孔各加2%NRS50μl，取阳性血清10μl，加第1孔混匀，并从中取出50μl加入第2孔混匀后取出50μl加入第3孔……直到第7孔混匀后弃去50μl，该孔的阳性血清稀释度为1:512，然后每孔各加抗原25μl，此即为阳性血清对照。 三、方法与步骤 3．判断方法和标准 先观察阴性血清对照孔和2%NRS对照孔，红细胞应全部沉入孔底，无凝集现象（—）或呈（＋）的轻度凝集为合格；阳性血清对照应呈（＋＋＋）凝集为合格。在以上3孔对照合格的前提下，观察待检血清各孔的凝集程度，以呈“＋＋”凝集的被检血清最大稀释度为其血凝效价（血凝价）。血清的血凝价达到1:16为免疫合格。 三、方法与步骤 3．判断方法和标准 “++++”表示100%红细胞凝集 “+++” 表示75%红细胞凝集 “++” 表示50%红细胞凝集 “+” 表示25%红细胞凝集 “-” 表示红细胞100%沉于孔底，完全不凝集。 ? 技能点10 间接血凝试验