动物多倍体诱导方法.docVIP

人工诱导动物多倍体的方法 《生物学教学》2016年第10期《人工诱导动物多倍体的方法初探》，关于诱导动物多倍体的方法主要有哪些，这篇文章介绍并总结了人工诱导动物多倍体的原理、方法和意义，摘录下来学习。 一、动物多倍体的产生机理 多倍体产生的诱导因子往往是异常环境条件，如：异常温度、水分、养分、创伤、雷电、射线等。 鱼类中有天然存在的三倍体，如黑龙江水系的银鲫、日本关东系银鲫等，鱼类远缘杂交可以产生异源四倍体。 人工诱导多倍体的机理就是利用极体排放时的条件控制，达到抑制第一极体或第二极体的排放，从而产生多倍体生物。精卵结合后抑制第二极体的排出，可生成三倍体；若抑制二倍体受精卵的第一次卵裂，可以产生四倍体。 二、人工诱导动物多倍体的方法 1、物理方法 （1）温度休克法 冷休克法（0-5oC）适用于温水性鱼类（如鲤科类），热休克法（30 oC左右）适用于冷水性鱼类（如鲑科类）。 温度休克法的作用机制是引起细胞内酶构型的改变，不利于酶促反应的进行，导致形成纺锤体所需的ATP供应途径受阻，从而诱导多倍体的产生。 对受精卵处理要注意三个关键因素：处理选择时刻、处理持续时间、处理温度。 若阻止第二极体外排，受精后马上处理；若抑制第一次卵裂，应该在第一次有丝分裂中期进行处理。 （2）静水压法 利用水压机产生较高的静水压来抑制第二极体的放出或第一次卵裂而产生多倍体。 作用机制：抑制纺锤体的微丝和微管的形成，阻止染色体的移动，从而抑制细胞的分裂。 对鱼类操作的有效方法，有以下优点：1.休克的最佳条件易于掌握，处理程序易于标准化2.诱导率较高3.处理时间短，一般3—5min4.对受精卵损伤小，成活率高 （3）电休克法 采用10V左右的直流或交流电对受精卵进行刺激，近年才开始采用，技术不成熟，使用较少。 2、化学方法 秋水仙素、细胞松弛素B（CB）、6-甲基氨基嘌呤（6-DMAP）、聚乙二醇（PEG）、咖啡因、N2O和CHClF2（二弗一氯甲烷）等。贝类较多用CB，影响纺锤丝内微管的形成，抑制纺锤体的正常收缩，使细胞分裂受阻。还可以采用高PH或高盐诱导产生多倍体。 注意处理的起始时间、持续时间、药物使用浓度。生产上不常用，成功率比物理法低，且有些药物有毒性，诱导产生的也是嵌合体居多。 3、生物学方法 异源远缘杂交、细胞融合法，处于初始阶段。