ayl-s7-345血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程3.0.pdf

安徽医科大学第一附属医院检验科 作业指导书 文件编号: AYL-S7-337 版本:3.0 页码: 第 1 页 共 4 页 审核者： 批准人： 编写者：沈继录 生效日期：2012.1.1 文件发放范围：微生物组 文件年度审核 审核者： 审核者： 审核者： 审核者： 日期： 日期： 日期： 日期： 血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程 1．目的 规范血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围 血液及骨髓。 3．标本 3.1 标本类型 血液及骨髓。 3.2 标本采集 3.2.1 采血时间 抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。 3.2.2 采血频率 对怀疑菌血症的成年病人，推荐同时在不同部位采集2～3套 (每套包括一瓶需氧瓶、一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶)，对感染性心内膜炎和真菌血症 则应多次采集；婴幼儿病人，推荐同时在不同部位采集2套，可不做厌氧培养。 3.2.3 采血量 以培养基的1 ／10为宜，成人一次采血5～ 10 ml，婴幼儿为 1～2 m1。 3.2.4 骨髓标本 用骨髓穿刺针从髂骨采集。 3.3标本拒收标准 3 3．1血培养瓶破裂或有明显污染。 3 3 2 培养瓶标识与化验申请单不符。 3．3 3用过期的培养瓶采集标本、采血量不足等。 3.3.4 对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。 3.4 标本保存 采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，切勿放冰 箱。冬季血培养瓶在送检过程中应采取一定的保暖措施。 安徽医科大学第一附属医院检验科 作业指导书 文件编号: AYL-S7-337 版本:3.0 页码: 第 2 页 共 4 页 4．试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平 板、相关生化试剂等。 4.2 BACT ／Alert 3D或BACTEC 9000全自动血培养系统、VITEK鉴定系统。成人需氧 血培养瓶、厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、革兰阴性菌鉴定卡 (GNI+)、革兰阴性菌药敏 卡 ((GNS)、革兰阳性菌鉴定卡 (GPI)、革兰阳性菌药敏卡 (GPS)、真菌鉴定卡 (YBC)、药 敏纸片、ATB板条等。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养箱等。 4.4 试剂的有效期和使用参照试剂说明书。 5．细菌鉴定和药敏质控 参见《质量管理程序》。 6．检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。门诊病人要同时登记住址，联系电话等 病人信息。 6.1 自动化培养 将血培养瓶置全自动血培养仪中。当标本有菌生长时，仪器发出 阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作直接涂片革兰染色，镜检，将结果向 临床医师报告，同时转种血琼脂平板、麦康凯平板（或中国蓝平板）或加做巧克力平板， 并进行直接药敏试验，置35℃、5％C02培养箱培养18～24小时。从琼脂平板上挑取菌 落进行涂片染色及触酶和氧化酶试验。革兰阳性菌和革兰阴性菌分别选用GPI及GNI上 机进行细菌鉴定和药敏试验或者做K—B法药敏试验 (具体操作见《药物敏感性标准操 作规程》)。 6.2手工培养 6.2.1将血培养瓶置35℃孵育箱，经18～20小时孵育在血琼脂平板或巧克力平板 上盲目转种一次。 6.2.2盲目转种后，培养瓶继续孵育至第5 日，每日观察一次有无菌生长，并摇匀继 续培养，下列几种情况提示有细菌生长 (表5—28)。 表5—28培养瓶中有细