基因工程制药新版3.pptVIP

差异展示 PCR 法 （ DD-PCR) 原理：将具有两组细胞在某 一条件下可表达的 mRNA 群 体通过逆转录方法变成相应 的 cDNA 群体，以此为模板， 利用一对特殊引物，在一定 条件下进行 PCR 扩增，得到 与 mRNA 相对应的 DNA 。通 过变性聚丙烯酰胺电泳，检 测差异条带。 构建 cDNA 文库 依据表达序列标签 EST ，设计引物用 PCR 技 术扩增基因组中特异片段。 四、外源 DNA 与载体 DNA 的切割与连 接 DNA 连接 ---- 目的基因 DNA 片段与载体 DNA ，在 DNA 连接酶作用下，通过形成磷酸二酯键，最终构成 重组 DNA 分子的过程，称为 DNA 的连接。 粘接法 ---- 具有互补粘性末端的目的基因，与载体 DNA ， 在 DNA 连接酶的作用下，通过形成共价键结合，称为 粘结法。具体有 插入灭活法 、 定向克隆法 、 载体脱磷 克隆法 、 同聚接尾法 、 双接头法 、 合成连接一步法 。 平接法 ---- 具有 3- 羟基、和 5- 磷酰基的平齐末端的 DNA 之间，在 T4-DNA 连接酶 的作用下，通过形成共价键 结合，称为平结法。 下面具体讲解 6 种方法。 （一）、插入灭活法 1 、定义与方法 2 、例子 3 、优缺点